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微生物检验结束后,立即将台面收拾干净。被污染的玻璃器皿及阳性的检验标本,都必须用消毒水浸泡过夜或用煮沸、高压蒸汽灭菌等方法处理后再清洗或丢弃。使用前再按物品危险性的种类,选择适当的消毒、灭菌方法进行消毒或灭菌处理。
07-2021
新购入玻璃器皿常附有游离碱,不可直接使用,应先在2%盐酸溶液中浸泡数小时,以中和碱性,然后用肥皂水及洗衣粉洗刷,再以清水反复冲洗数次,最后用蒸馏水冲洗。
由于微生物广泛存在于环境中,从预防交叉污染的角度出发,微生物实验必须遵循无菌操作的原则,采用多种物理、化学或是生物的方法,确保所有的物品和工作环境符合使用要求。
接种技术是微生物学实验中最常用的基本操作技术,接种就是利用接种工具在无菌条件下将培养物往新的培养基上移植。
从混杂的微生物群体中获得单一菌株的方法称为分离纯化。分离纯化可采用琼脂平板划线分离法、倾注平板法、平板表面涂布法等。需要注意的是,一次分离纯化操作得到的单菌落并不一定保证是单一菌株,因此,单一菌株的确定除观察其菌落特征外,还要结合显微镜观察个体形态特征后才能确定,有些微生物要经过多次分离纯化过程才能得到单一菌株。
由于细菌体积小且透明,活体细胞内又含有大量水分,因此,对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。当把细菌悬浮在水滴内,放在显微镜下观察时,由于与背景没有明显的明暗差,难于看清它们的形状与结构,为了更好地看清微生物的形态结构,就必须对它们进行染色,这样就可在普通光学显微镜下清晰地观察到微生物的形态结构。因此,微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。但是,染色观察时必须注意,染色后的微生物标本是死的,在染色过程中微生物的形态结构可能会发生一些变化,不能完全代表其活细胞的真实情况。
显微镜是研究微生物必不可少的工具。自从发明了显微镜后,人们才能观察到各种微生物的形态,从此揭开了微生物世界的奥秘。随着科学技术不断发展,显微镜可利用的光源已从可见光扩展到紫外线,接着又出现了利用非光源的电子显微镜,从而大大提高了显微镜的分辨率。借助各种显微镜,人们不仅可以观察到真菌、细菌的形态和构造,还能清楚地观察到病毒的形态和构造。
微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,因此,菌种保藏方法虽多,但都是根据这3个因素而设计的。国际国内常用的菌种保存方法包括传代培养法、液态石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、-80℃冰箱冻结法、液氨超低温冻结法。
菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养,逐级扩大培养得到纯而壮的培养物,即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。一般需要2~3代的复壮过程,让菌种逐渐适应培养环境。对于不同的保存方式,活化的方式也不同。
不同种类微生物的代谢途径及代谢产物不同,可利用一些生化反应来测定这些代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其他方面不易区别的微生物,微生物生化鉴定是微生物分类鉴定中的重要依据之一,目前,多采用商品化的成套生化试剂盒来完成生化鉴定试验,所以本书只着重介绍各类生化反应的原理,试验方法若与试剂盒方法存在差异,以试剂盒方法为准,如需了解试剂配制请参见相关国家标准。
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