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定性分析,就是确定色谱图中每个色谱峰究竟代表什么组分。色谱分析中,利用保留时间定性是最基本的定性方法:相同的物质在同一色谱条件下,应该有相同的保留时问。但是,相反的结论却不成立,即在相同色谱条件下,具有相同保留时间的两个色谱峰,不一定是同一物质。
分别将未知样品和已知标准物倒在同一根色谱柱上,用相同的色谱条件分析,获得色谱图后进行对照比较。如果未知样品中的某个峰与标准品的保留时间相同,则可初步推测是该化合物,但是否肯定是该化合物,则要用质谱进行确证。分析中经常会碰到复杂基质样品,由于杂质成分与待测化合物性质相似或接近,就可能在色谱行为上表现一致,反映在色谱图中,就是出现与待测化合物标准品保留时间一致的色谱峰,可能是单一组分峰,也可能是多组分重叠峰。对于这些峰,仅靠保留时间定性,就容易出现误判。出现这种情况,多半是样品未净化完全、杂质峰干扰效应等,尤其在含硫化合物较多的葱、姜、蒜样本的有机磷农药残留检测中经常出现。
定量分析,就是根据色谱峰峰高或峰面积来计算样品中各组分的含量,常用的定量方法有峰面积百分比法、归一化法、内标法、外标法和标准加入法。
避免出现假阳性结果的方法有:
(1)样品中添加标准品,对比保留时间并测定加标回收率,看色谱峰及面积是否变化。
(2)改变色谱柱升温程序,看样品中该色谱峰保留时间与标准品保留时间有无差别变化。
(3)利用两根不同极性的色谱柱,或不同类型检测器进行双柱、双检测器定性。
(4)采用质谱或二级质谱进行全扫描并与标准物质质谱图对比,将主要定性离子和组成比例与谱库中对比,看是否一致。
文章来源:《农产品质量安全检测》
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