二、离子色谱法

2015年版《中国药典》收录了离子色谱法。离子色谱法系采用高压输液泵系统将规定的洗脱液泵入装有填充剂的色谱柱对可解离物质进行分离测定的色谱方法。注入的供试品由洗脱液带入色谱柱内进行分离后，进入检测器(必要时经过抑制器或衍生系统)，由积分仪或数据处理系统记录并处理色谱信号。离子色谱法常用于无机阴离子、无机阳离子、有机酸、糖醇类、氨基糖类、氨基酸、蛋白质、糖蛋白等物质的定性和定量分析：它的分离机制主要为离子交换.即基于离子交换色谱固定相上的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子之间进行的可逆交换；离子色谱法的其他分离机制还有形成离子对、离子排阻等。

(一) 对仪器的一般要求

离子色谱仪器中所有与洗脱液或供试品接触的管道、器件均应使用惰性材料，如聚醚醚酮(PEEK)等。仪器应定期检定并符合有关规定。

1. 色谱柱离子交换色谱的色谱柱填充剂有两种，分别是有机聚合物载体填充剂和无机载体填充剂。

(1) 有机聚合物载体填充剂：最为常用，填充剂的载体一般为苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、乙基乙烯基苯-二乙烯基苯共聚物、聚甲基丙烯酸酯或聚乙烯聚合物等有机聚合物。这类载体的表面通过化学反应键合了大量阴离子交换功能基(如烷基季铵、烷醇季铵等)或阳离子交换功能基(如磺酸、羧酸、羧酸-膦酸和羧酸-膦酸冠醚等)，可分别用于阴离子或阳离子的交换分离。有机聚合物载体填充剂在较宽的酸碱范围(pH0～14)内具有较高的稳定性，且有一定的有机溶剂耐受性。

(2) 无机载体填充剂：一般以硅胶为载体。在硅胶表面化学键合季铵基等阴离子交换功能基或磺酸基、羧酸基等阳离子交换功能基，可分别用于阴离子或阳离子的交换分离。硅胶载体填充剂机械稳定性好、在有机溶剂中不会溶胀或收缩。硅胶载体填充剂在pH2～8的洗脱液中稳定，一般适用于阳离子样品的分离。

2. 洗脱液离子色谱对复杂样品的分离主要依赖于色谱柱中的填充剂，而洗脱液相对较为简单。分离阴离子常采用稀碱溶液、碳酸盐缓冲液等作为洗脱液；分离阳离子常采用稀甲烷磺酸溶液等作为洗脱液。通过调节洗脱液pH值或离子强度可提高或降低洗脱液的洗脱能力；在洗脱液内加人适当比例的有机改性剂，如甲醇、乙腈等可改善色谱峰峰形。制备洗脱液的水应经过纯化处理，电阻率大于18MΩ·cm。使用的洗脱液需经脱气处理，常采用氦气等惰性气体在线脱气的方法，也可采用超声、减压过滤或冷冻的方式进行离线脱气。

3.检测器电导检测器是离子色谱常用的检测器，其他检测器有安培检测器、紫外检测器、蒸发光散射检测器等。

(1) 电导检测器：主要用于测定无机阴离子、无机阳离子和部分极性有机物，如羧酸等。离子色谱法中常采用抑制型电导检测器，即使用抑制器将具有较高电导率的洗脱液在进入检测器之前中和成具有极低电导率的水或其他较低电导率的溶液，从而显著提高电导检测的灵敏度。

(2) 安培检测器：用于分析解离度低，但具有氧化或还原性质的化合物。直流安培检测器可以测定碘离子(Ⅰ-)、硫氰酸根离子(SCN-)和各种酚类化合物等。积分安培检测器和脉冲安培检测器则常用于测定糖类和氨基酸类化合物。

(3) 紫外检测器：适用于在高浓度氯离子等存在下痕量的溴离子(Br-)、亚硝酸根离子(NO₂-)、硝酸根离子(NO₃-)以及其他具有强紫外吸收成分的测定。柱后衍生-紫外检测法常用于分离分析过渡金属离子和镧系金属离子等。

原子吸收光谱、原子发射光谱(包括电感耦合等离子体原子发射光谱)、质谱(包括电感耦合等离子体质谱)也可作为离子色谱的检测器。离子色谱在与蒸发光散射检测器或(和)质谱检测器等联用时，一般采用带有抑制器的离子色谱系统。

(二) 样品处理

对于基质简单的澄清水溶液一般通过稀释和0.45um滤膜过滤后直接进样分析。对于基质复杂的样品，可通过微波消解、紫外光降解、固相萃取等方法去除干扰物后进样分析。

(三) 色谱条件与系统适用性试验

采用离子色谱法，阴离子抑制器，电导检测器检测。

色谱柱：AS-11-HC(250mm×4mm)，保护柱为AG-11-HC(50mm×4mm)，淋洗液为20mmol/L氢氧化钾溶液，流速为1ml/min，柱温为30℃。或色谱柱为Metrosep A Supp5(150mm×4.0mm)，保护柱：Metrosep RP Guard通用保护柱。

淋洗液：3.2mmol/L Na₂CO₃，1.0mmol/L NaHCO₃，等度淋洗。

流速：0.7ml/min。

进样量：20ul。

对照品溶液的制备：取硫酸根标准溶液(中国计量科学研究院，浓度为1000ug/ml)，加水制成每1ml分别含硫酸根0.5、1、2、5、10、20、50、100、150、200ug/ml的溶液，各进样10ul，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备：取供试品粉末10g(过三号筛)，置瓶A(两颈烧瓶)中，加水50ml，摇匀，接通水蒸气蒸馏瓶C。吸收瓶B(100ml刻度管)中加入3%过氧化氢溶液20ml作为吸收液，吸收管下端插入吸收液液面以下。A瓶中沿瓶壁加入5ml盐酸，迅速密塞。开始蒸馏，收集馏出液约100ml，加水稀释至刻度，摇匀，放置3小时(必要时离心或以微孔滤膜滤过)，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，进样，测定，采用标准曲线法计算样品中硫酸根含量，照(SO₂/SO₄^2-=0.6669)折算成样品中二氧化硫的含量。

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文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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