高效液相色谱法含量测定常用的方法主要有内标法、外标法和面积归一化法等，检测器一般UV即可。

一、 内标法

按药典品种正文项下的规定，精密称(量)取对照品和内标物质，分别配成溶液，各精密量取适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量进样，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：

式中，As为内标物质的峰面积或峰高；AR为对照品的峰面积或峰高；cs为内标物质的浓度；cR为对照品的浓度。

再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，进样、记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：

式中，Ax为供试品的峰面积或峰高；cx为供试品的浓度；A's为内标物质的峰面积或峰高；c's为内标物质的浓度；f为内标法校正因子。

采用内标法，可避免因供试品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。

二、 外标法

按各品种项下的规定，精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，进样、记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测物质的峰面积(或峰高)，按下式计算含量：

含量(c_x)=C_R×A_x/A_R...............(式9-6)

式中，cx为供试品的浓度；CR为对照品的浓度；Ax为供试品的峰面积或峰高；AR为对照品的峰面积或峰高。

由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定时，以手动进样器定量环或自动进样器进样为宜。

三、 面积归一化法

按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量进样，记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。用于杂质检查时，由于仪器响应的线性限制，峰面积归一化法一般不宜用于微量杂质的检查。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(五)》

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