(四) 药品残留溶剂的快速检测技术

药品中残留溶剂的种类随着生产工艺的变化而不同，当药品中残留溶剂的种类发生变化时，如果按照固定不变的方法进行检测，则可能造成误检或漏检。如何快速鉴别药品中残留溶剂的种类，就构成了药品残留溶剂检测的难点。药品残留溶剂测定的初筛知识库，较好地解决了这一难题。

1. 药品中残留溶剂的初筛知识库

(1) 基本原理：在气相色谱中溶质的保留值与色谱柱固定液的相互作用有关，非极性组分和非极性固定液分子间的作用力主要是色散力，组分基本按照沸点高低的顺序，低沸点组分先出峰；沸点相同的组分极性强的先出峰。强极性组分与极性固定液分子间的主要作用力为定向力，组分按极性顺序，极性强的组分后出峰。溶质的保留值与溶质本身的结构有关。对未知物定性仅用·个保留值数据是不够的。因为不同化合物在同·色谱柱上可能有相同的保留时间；而不同化合物在不同色谱柱上具有相同保留时间的概率很小，所以采用双柱或多柱定性是气相色谱中较可靠的定性方法。一般认为，物质在非极性色谱柱中的出峰顺序主要受其疏水作用力的影响，而在极性色谱柱上则由多种相互作用力共同决定。因此，如果采用两个不同极性的色谱柱系统，则更可以大大提高定性分析的准确度；采用双柱定性时，所选择的两根色谱柱的极性差别越大，定性分析结果的可信度越高。

气相色谱巾常用的溶剂保留参数有保留时间(tR)、相对保留时间(RRT，即相对保留值ri，s)和相对调整保留值(RART)。用保留时间(tR)定性，要求载气的流速、温度及柱温恒定。微小波动都会使保留时间改变，从而对定性结果产生影响。为了避免载气流的变化对定性分析结果的影响，可以用相对保留时间(RRT)定性。在相同色谱条件系统中，当载气的流速发生变化时，被测组分与参比组分的保留时间同时发生变化，因而它们的比值不变；虽然当色谱柱的膜厚或者口径改变时，RRT值存在系统误差，彼此间没有可比性，但由丁不用测定t0使用方便，当色谱柱固定时，仍可作为较可靠的定性参数，月此系统误差可通过线性转化法进行适当校正。而相对调整保留时间(RART)为被测组分与参比组分的调整保留时间的比值，由于扣除了t0的影响，只与固定相的种类和温度有关，是较理想的定性参数。

(2) 基于相对保留时间的残留溶剂定性知识库：采用固定液为100%二甲基聚硅氧烷的非极性SPB-1柱和固定液为聚乙二醇-硝基对本甲酸修饰的极性HP-FFAP柱，测定有机溶剂在不同色谱中的保留值。将51种有机溶剂按保留时间(tR)递增进行排序，得到一个有机溶剂在非极性SPB-1和极性HP-FFAP柱的等温和程序升温条件下的出峰顺序；并计算其相对丁酮的相对保留时间(RRT)；沸点较高的溶剂在低柱温条件下出峰时间太长甚至不出峰，所以用较高柱温测定高沸点溶剂的等温保留时间；进而得到基于RRT的残留溶剂测定定性知识库：2015年版《中国药典》收载该知识库。

(3) 基于相对调整保留时间的残留溶剂定性知识库：采用固定液为100%二甲基聚硅氧烷的非极性SPB-1柱和固定液为100%聚乙二醇的极性HP-INNOWAX色谱柱，以N2为载气，测定有机溶剂在不同色谱柱中的保留值。胡昌勤老师主编的《药物残留溶剂分析》，收载了基于相对调整保留时间的残留溶剂定性知识库包括双柱初筛等温知识库和双柱初筛程序升温知识库。RART不受色谱柱规格和膜厚的影响，是可靠的定性参数。以RART为定性基础的双柱初筛知识库可以在未知生产工艺的情况下全面、快速鉴别样品中的残留溶剂。

2. 残留溶剂的快速定量技术药品残留溶剂定量测定通常采用火焰离子化检测器(FID)，在一定浓度范围内，气相色谱峰的面积与组分的浓度成正比。利用有机浴剂对照品配制一系列不同浓度的溶液，在适宜色谱条件下测定诸溶剂的色谱峰面积，考察有机溶剂浓度与色谱峰面积的线性关系，得到的线性方程可用于估算药品中有机溶剂的残留量。

(1) 不同厂家仪器有机溶剂与峰面积的线性关系：以水为基本溶剂体系，必要时加2%二甲亚砜助溶。以信噪比为3定义各有机溶剂的检测限，信噪比为10定义各有机溶剂的定量限。由于不同气相色谱仪的数据采集系统不同，因此得到的色谱峰面积的单位也不同，但相同浓度的溶液在不同仪器上的峰面积存在一定的量值关系。胡昌勤主编的《药物残留溶剂分析》显示：Finnigan仪器上的峰面积(counts)=10×岛津2010仪器的峰面积(counts)=100000×Agilent6890仪器的峰面积(pA·s)。通过峰面积的换算，在不同气相色谱仪上得到的有机溶剂浓度与峰面积的线性关系数据可以相互使用。

(2) 初步定量知识库：SPB-1和HP-FFAP色谱柱系统、SPB-1和HP-INNOWAX色谱柱系统构成了残留溶剂测定的两大定性知识库系统。定性分析时，在确定药品残留溶剂种类的同时，还可以得到残留溶剂峰面积的信息。利用有机溶剂浓度与峰面积的线性关系，即可估出残留溶剂的量。因而在上述色谱柱系统中得到的有机溶剂浓度与峰面积的线性关系，即构成了残留溶剂测定初步定量知识库。胡昌勤老师主编的《药物残留溶剂分析》详细描述了各残留溶剂的浓度与峰面积的线性关系。

由于在建立初步定量知识库时采用水为溶剂，所以在实际残留溶剂的测定中也应以水为溶剂溶解样品，否则会由于残留溶剂在不同溶解介质中分配系数的差异，使得顶空平衡时顶空瓶气体部分的残留溶剂量与水为介质时不同，而无法准确估算。

利用初步定量知识库估测样品中残留溶剂的量，并非要求准确定量。当需要对药品中的残留溶剂进行准确定量测定时，通常应根据其中的溶剂残留量来确定对照品溶液的浓度。实际工作中，药品中实际的有机溶剂残留量通常并不知道，利用初步定量知识库，可以根据定性试验/预实验中得到的残留溶剂的峰面积估算出其大致的浓度，然后配制与此浓度相当的对照品溶液，使得对照溶液的浓度与样品中残留溶剂的浓度接近，确保它们在同一线性范围内，使得定量结果更为准确。

实际工作中，由于FID检测器状态的差异，可能造成峰面积响应的不同，由于残留溶剂种类只有69种，可以平时积累本台仪器关于各残留溶剂的浓度与峰面积的线性关系数据，用于定量的初步估算。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(五)》

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