三、残留溶剂测定

药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。由于残留溶剂没有疗效，并且从20世纪90年代以来残留溶剂的毒性及致癌作用逐渐引起国际医药界和管理部门的关注和重视。现行各国药典收载的残留溶剂指导原则均是在人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)制定的残留溶剂指导原则的基础上制定的。

(一) 药品残留溶剂的测定方法

残留溶剂的测定方法可分为：毛细管柱顶空进样等温法、毛细管柱顶空进样程序升温法、溶液直接进样法三种方法。

1. 毛细管柱顶空进样等温法色谱条件：柱温一般为40～100℃；常以氮气为载气，流速为1.0～2.0ml/min；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70～80℃；顶空瓶平衡时间为30～60分钟；进样口温度为200℃；如采用火焰离子化检测器(FID)，温度为250℃。

2. 毛细管柱顶空进样程序升温法色谱条件：柱温一般在40℃维持8分钟，在以每分钟8℃的升温速率升至120℃，维持10分钟；以氮气为载气，流速为2.0ml/min；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70～85℃；顶空瓶平衡时间为30～60分钟；如采用火焰离子化检测器(FID)，温度为250℃。

3. 溶液直接进样法可采用填充柱，亦可采用适宜极性固定液毛细管柱。

(二) 供试品溶液的制备

1. 顶空进样系统

(1) 浓度和供试品取样量的确定：通常，被检测溶剂的浓度约为10ug/ml时，均高于大部分残留溶剂的定量限(具体品种中的具体残留溶剂的定量限要由实验决定)。为了方便，可以假设残留溶剂A对照品的浓度(C)为50ug/ml，残留溶剂Ａ的限度(P)为0.05%，溶解供试品的溶液体积为V(5ml左右)，下式：

C=供试品取样量(M)×P÷V................(式8-5)

式中，如果V=5ml；供试品取样量M=500mg。

目前常用的顶空瓶通常为10ml和20ml两种，对于20ml瓶是这样，而对于10ml瓶，一般液体体积选择2～3ml。

通常，供试品取样量0.1～1g，具体的方法需要方法学实验支持。

(2) 测定残留溶剂时样品溶剂的选择：兼顾药品的溶解性和被测定溶剂的溶解性，对水溶性药品，通常以水为溶剂；当药品不溶于水，但可溶解于一定浓度的酸或碱液中时，顶空进样时可采用不挥发的酸或碱液为溶剂，溶液直接进样时，如果必须使用酸或碱，可使用挥发性的盐酸溶液或氨水；如果被测定溶剂水溶解性差，可以用合适的有机溶剂与水以一定比例混合作为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺或二甲基亚砜(DMSO)或合适的有机溶剂为溶剂；测定N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和(或)N,N-二甲基乙酰胺时，用1,3-二甲基咪唑啉酮为溶剂，进行顶空进样；药品无合适溶剂，应至少被浸润。供试品溶液不得超声。测定含氮碱性化合物，供试品溶液应不呈酸性，以免待测物与酸反应后不易气化，必要时，进行萃取。测定有机酸，供试品溶液应不呈碱性，以免待测物与碱反应后不易气化，必要时，进行萃取。测定酯类化合物，供试品溶液应呈中性，以免酯类化合物在酸性、碱性条件下水解。当药品在某种溶解介质中溶解后，使得样品中的残留溶剂或内标与体系产生较强的相互作用时，这种溶解介质不宜作为药品残留溶剂测定的溶剂。笔者曾经发现以1mol/L NaOH溶液为溶剂介质时，尽管对照品溶液与供试品溶液中内标丁酮的浓度相同，但是其峰面积却相差一倍；而溶剂介质为DMF时，相同浓度的丁酮内标在对照品溶液和供试品溶液中的峰面积几乎相同，提示丁酮在强碱性水溶液中与体系发生了某种相互作用。

2. 溶液直接进样系统精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据品种正文中残留溶剂的限度规定，配制供试品溶液，使其浓度满足系统定量测定的需要。

为了使用数据库时增加定性判别的把握性以及增加定量测定的准确性，通常在测定残留溶剂时使用内标溶液。

(三) 对照品溶液的制备

精密吸取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液。

1. 限度实验根据残留溶剂的限度规定，确定对照品溶液的浓度。

残留溶剂A对照品的浓度=供试品取样量×残留溶剂A的限度÷溶解供试品的溶液体积

2. 定量测定为保证定量结果的准确性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积不宜超过供试品溶液中对应的残留溶剂色谱峰面积的2倍。必要时应重新调整供试品溶液和对照品溶液的浓度。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(五)》

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