1范围

本标准规定了蜂王浆中土霉素(oxytetracycline, OTC)、四环素(tetracycline, TO、去甲金霉素(demethylchlortetracycline, DMCTC)、金霉素(chlorotetracycline, CTC)和强力霉素(doxycycline, DC)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂王浆中土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素和强力霉素残留量的测定。

2 方法提要

试样中的待测抗生素用EDTA-Mcllvaine缓冲液提取，甲醇沉淀样品中的蛋白质，清液过HLB固相萃取柱和COOH型离子交换柱净化。液相色谱-串联质谱法测定样品中的待测物，外标法定量。

3 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。

3.1 甲醇：液相色谱级试剂。

3.2 乙腈：液相色谱级试剂。

3.3 乙酸乙酯：液相色谱级试剂。

3.4 草酸(C₂H₂O₄·2H₂O)。

3.5 磷酸氢二钠。

3.6 柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)。

3.7 乙二胺四乙酸二钠(Na₂·EDTA)。

3.8 氢氧化钠。

3.9 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液：称取28.41 g磷酸氢二钠溶于适量水，再定容至1 000 mL。

3.10 0.1 mol/L柠檬酸溶液：称取21.01 g柠檬酸溶于适量水，再定容至1 000 mL。

3.11 McIlvaine缓冲溶液：将625 mL 0. 2 mol/L磷酸氢二钠溶液(3.9)与1 000 mL 0.1 mol/L柠檬酸溶液(3.10)混合，用磷酸调节pH=4. 0。

3.12 EDTA-McIlvaine缓冲溶液：称取60.5g乙二胺四乙酸二钠，加入1 625 mL McIlvaine缓冲溶液(3.11)中，使其溶解摇匀。

3.13 氢氧化钠溶液：1 mol/L。

3.14 5％(体积分数)甲醇水溶液，将5 mL甲醇与95 mL水混合摇匀。

3.15 甲醇-乙酸乙酯混合液：将10 mL甲醇与90 mL乙酸乙酯混合摇匀。

3.16 0.01 mol/L草酸溶液：称取1. 26 g草酸溶于适量水，再定容至1 000 mL。

3.17 草酸-乙腈混合液((80+20，体积比)：将80 mL草酸溶液((3.16)与20 mL乙腈混合摇匀。

3.18 四环素族抗生素标准品：土霉素盐酸盐(OTC·HCl)纯度大于等于97.9 %，四环素盐酸盐(TC·HCl)纯度大于等于97.0％，去甲金霉素盐酸盐(DMCTC·HCl)纯度大于等于99.0%，金霉素盐酸盐(CTC·HCl)纯度大于等于99.0％，强力霉素(DC)纯度大于等于96.5%。

3.19 标准储备液：分别称取OTC·HCl 10.8 mg, TC·HCl 11.0 mg, DMCTC·HCl 10.8 mg,CTC·HCl 10.8 mg, DC 10.4 mg，用甲醇溶解并定容到100 mL容量瓶中，溶液浓度为0.1mg/mL,-18℃保存，有效期6个月。

3.20 混合标准中间液：分别准确移取适量0.1 mg/mL OTC、TC、DMCTC、CTC、DC储备液(3.19),用甲醇稀释定容为20 ng/mL, 0℃～4℃保存，有效期1个月。

3.21 混合标准工作溶液：根据需要，将中间液(3.20)用阴性样品处理液稀释至适当浓度的工作溶液。

3.22 HLB固相萃取柱：500 mg, 6 mL。使用前分别用5 mL甲醇和10 mL水预洗并保持柱体湿润。

3.23 离子交换柱：COOH型固相萃取柱，500 mg, 3 mL。使用前用5 mL乙酸乙酯预洗并保持柱体湿润。

4 仪器和设备

4.1 液相色谱-质谱/质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI)。

4.2 离心机(2500g)。

4.3 混匀器。

4.4 真空固相萃取装置。

4.5 pH计。

4.6 具盖塑料离心管：50 mL。

4.7 电子天平。

5 制样

5.1 试样的制备

将抽取的样品充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内，一份作为留样保存，另一份作为试样供检测用。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生含量的变北。

5.2 试样的保存

试样宜及时检测，在不能及时检测的情况下，应置于-18℃以下冷冻保存。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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