6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

原始样品总量不得少于500 g，采用四分法，将样品分成两等份装入洁净容器，加封并做标识。

6.2试样的保存

将样品于-20℃～-18℃条件下保存。

7 分析步骤

7.1 提取

称取2.5 g(精确到0. 01g)蜂王浆至带盖样品管中，加入10 mL 1 mol/L的盐酸((4.9)，摇匀直至完全溶解；6 000 r/min离心10 min后，滤纸过滤，取上清液，用30％氢氧化钠(4.10)或1 mol/L盐酸(4.9)溶液将提取液pH值调到7.0～8.0; C₁₈柱(4.13)预先用5 mL甲醇(4.11)和5 mL蒸馏水活化后，将滤液全部倒入C18柱，用5 mL蒸馏水淋洗柱子，用负压去除残留的液体，并且在弱空气或氮气吹2 min干燥柱子。加2 mL甲醇洗脱，用干净试管收集，40℃～45℃氮气吹干，加5 mL MSU萃取缓冲液(4.4)，置于冰浴中放置10 min待测。

7.2 测定

7.2.1 从试剂盒中取出试剂片，用移液器取300uL，水至样品试管中，用试剂盒中所附压杆将白色受体药片(4.1.5)推出到试管中，涡旋混合10s将药片打碎。加入4.5mL MSU萃取缓冲液(4.4)和0.5 mL、样品待测液：阴性和阳性对照管中则直接加入5mL、阴性对照液(4.7)和5 mL阳性对照液(4. 8)。

7.2.2 将粉红色磺胺氖标记药片(4.1.6)推至试管中，用涡旋混合器混合10 s。

7.2.3 将试管置于65℃±2℃的孵育器保温3 min,

7.2.4 取出试管，在3300 r/min(离心力为1750g)条件下离心3 min，立即弃去上清液，用吸水纸将测试管边缘的水渍吸干。加300 uL水，用试管混合器混合10 s将沉淀物打碎。

7.2.5 分别加3 mL闪烁液(4.6)至试管中．加盖，混匀，在Charm Ⅱ7600分析仪上以[³H]频道上进行1 min计数cpm。

8 结果判定

8.1 控制点的确定

控制点是界定样品阴性与初筛阳性的一个界限值，对于同一批号的试剂盒，正常情况下只需测定一次控制点。控制点(磺胺10 ug/kg)设置如下，称取2.5g空白基样(4.14)蜂王浆，加入25 uL MSU多抗生素标准品溶液(4.3)；按照7.1进行前处理，再按7.2进行测试。取该6个加标样品平行测试的cpm读数平均值，乘以系数1.1作为筛选测定的控制点。还可根据所需的筛选水平重新设置相应的控制点。

8.2 结果判定

当样品测定cpm值比控制点大，可判定为样品“阴性”，即样品中磺胺类抗生素残留小于筛选水平；若测定cpm值小于或等于控制点，应判定为初筛阳性，应使用仪器方法进一步进行确证分析。

9 确证试验

如被测样品中磺胺类药物残留量的值大于限量要求时，应用仪器检测方法进行确证。

10 检出限

本标准的方法检出限：磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对二甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺噻唑、磺胺噻唑、磺胺异噁唑、磺胺二甲基异噁唑、磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺苯吡唑和磺胺甲噻二唑等磺胺类药物残留总量10 ug/kg。

相关链接：进出口蜂王浆中磺胺类药物残留量测定（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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