4.3 仪器和设备

4.3.1 培养皿：玻璃或塑料皿，内径为90 mm，底部平整光滑，具陶瓦盖。

4.3.2 牛津杯：不锈钢管，内径(6±0.1) mm，外径(8±0.1) mm，高度(10±0.1)mm。

4.3.3 游标卡尺：测量范围0～200mm，精度0.02mm。

4.3.4 绞肉机。

4.3.5 均质器：转速不低于10000r/min。

4.3.6 离心机：转速不低于4000r/min。

4.3.7 恒温箱：(36±1)℃，搁板必须保持水平。

4.3.8 高压灭菌器。

4.3.9 电热烤箱：(170±1)℃。

4.3.10 恒温水浴锅。

4.3.11 其他：玻璃板、移液管、滴管、离心管等。

4.4 测定步骤

4.4.1 样液制备

称取10 g(精确至0.1g)试样于均质器内，加入磷酸盐缓冲液(pH8.0±0.1)10.0mL，搅匀，放置60 min，以9000～10000r/min均质2 min后，移入离心管中离心30 min(4000r/min)，取上清液作为样液。

4.4.2 菌悬液的制备

将试验菌种用营养肉汤(4.2.5)于32～35℃培养18～24 h后，转接至琼脂试管斜面(4.2.7)，于32～35℃培养18～24 h，然后加入适量灭菌生理盐水，将菌苔洗下，制成菌悬液。在4℃保存，可使用2周。

4.4.3 菌悬液用量的确定

制作检定平板前应先用0.312 IU/mL，标准工作液对加有不同量菌悬液的平板进行预测试，经培养后能六生直径李10 mm清晰、完整的抑菌圈的最佳菌悬液用量。

4.4.4 平板制备

于无菌平皿中加入印mL熔化的培养基(4.2.7)，保持水平，待其凝固。然后，将锥形瓶中培养基(4.2.7)熔化并冷却至41～50℃，加入适量(从4.4.3预测得)的菌悬液(4.4.2)，充分混合，取4 mL注入上述基层培养基上，均匀覆盖其表面，保持水平，待其凝固。

4.4.5 标准曲线的制备

按照SN 0179-9-9中的6.1进行。

4.4.6测定

每个试样用三个检定平板。如不需定量测定时，在每个平板上，置4只灭菌的牛津杯，对角2只注满样液，剩余的2只分别注满1.250和0.312 IU/mL柱晶白霉素标准工作液；如需定量时，须置6只灭菌的牛津杯，间隔注满样液和1.250 IU/mL(作为参考浓度溶液)柱晶白霉素标准工作液，于(36±1)℃培养(17±1)h。

注：如测定结果呈阳性．即所显抑菌圈的平均直径≥10mm时，必要时，尚需进行确证试验(可用薄层色谱法)，以证明抑菌物确系柱晶白霉素。

4.5 结果计算和表述

如样液抑菌圈的直径＜10 mm，即报告为“阴性”。如样液抑菌圈的平均直径≥10 mm者，则分别测量及算出三个检定平板上1.250 IU/mL标准工作液和样液的抑菌圈直径的平均值。经校正后，于标准曲线上查出样液中相应的柱晶白霉素浓度值。通过式(1)，可得出试样中柱晶白霉素的含量：

式中：X—试样中柱晶白霉素含量，IU/g;

c—由标准曲线上查得样液中柱晶白霉素浓度，IU/mL;

m—每毫升最终样液所代表的试样量，g。

注：如试样中柱晶白霉素含量以mg/kg表示时，河将式(1)所计算得的X值乘以1000/t, t为柱晶白霉素标准品以IU/mg计的效价

5 测定低限、回收率

5.1 测定低限

本方法的测定低限为0.312 IU/g。

5.2 回收率

回收率的实验数据：

柱晶白霉素添加浓度在0.112 IU/g时，回收率为87.7％;

柱晶白霉素添加浓度在0.800 IU/g时，回收率为83.7％;

柱晶白霉素添加浓度在1.000 IU/g时，回收率为84.3％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。