3.3 仪器和设备

3.3.1 液相色谱仪并配备荧光检测器。

3.3.2 微量注射器：10uL，50uL。

3.3.3 保护柱：CO:FELL ODS, 2 mm(内径)×5cm。

3.3.4 微孔过滤器：0.2um, 0.45 um滤膜。

3.3.5 玻璃刻度离心管：具磨口塞，15 mL。

3.3.6 离心机。

3.3.7 捣碎机。

3.3.8 吸移管．

3.3.9 pH计。

3.3.10 涡式混匀器。

3.3.11 真空抽滤器。

3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

3.4.1.1 取试样代表性部位，以捣碎机进行充分匀化。匀化后的试样在分析前一直冷冻保存。

3.4.1.2 将一去皮重的烧杯置于天平上，烧杯中放一50 mL玻璃离心管(未加塞)，用粗管尖吸移管取样，称取2.5±0.05g均匀试样，置于离心管底部。如此分别制备四份空白组织试样，及一份对照试样，三份添加标准的试样。在对照试样中加入100 uL纯DMSO。在疑有丙硫咪喹残留物的组织试样中加入50 uL DMSO。在空白组织试样和疑有丙硫咪唑的组织试样中分别加入50 uL工作溶液(3.2.16.4)。然后，在已加入50uL工作溶液(3.2.16.4)的三个空白组织试样中分别加入50uL工作溶液(3.2.16.1)、(3.2.16.2)、(3.2.16.3)。

注：应将添加溶液加于50 mL管内刚好浸没均匀试样。以便下一步加入HCl时确保有足够的溶液。

3.4.1.3 在3.4.1.2制备的每一试样中加入2.5mL 6 NHCl，盖好每支管，然后将试样管(用另一试管架固定，以防塞子突然跳出)放到预先调至110±4℃的烘箱内。3.4.1.4在1h后，把试样从110±4℃的烘箱中取出，将试样管放于干冰或冰上约5 min，冷却至室温。

3.4.1.5 向每个试样中加入2.0 mL水，然后以涡式混匀器混匀试样，用pH计监测pH值。慢慢加入足量(约1.23g)的碳酸钠，加入时间约需4～5 min，以免起泡或结块，调节pH至8～9.5(将洁净的pH电极直接放入试样中测定。记录pH值后，在离心管内壁上轻轻接触去掉电极上的液滴。将整个电极从试样管中取出，用水冲洗，擦干后再测定下一个试样)。

注：室温或接近室温的试样，加入碳酸钠时象较冷试样那样不会产生泡沫，因此，加入碳酸钠时可以快些。

3.4.1.6 向每个试样内加入15 mL乙酸乙酯，盖上塞子，平放于试管架上，振摇5 min。然后取下塞子，于约4000r/min将试样离心5 min。

3.4.1.7 用吸移管将乙酸乙酯提取液转入另一50 mL玻璃离心管内，应尽量转移完全。注意不要带走水相。

3.4.1.8 重复操作3.4.1.6和3.4.1.7步骤，再次提取每个试样，把相应的提取液合并于各自的50mL玻璃离心管内。

3.4.1.9 向每个合并的乙酸乙酯提取液中加入4.0 mL 1 N HCl，盖上塞子，平放于试管架上，振摇5 min。取下塞子，然后于4000r/min左右离心5 min。

3.4.1.10 尽量完全吸去乙酸乙酯相，注意不要带走水相。在35±5℃水浴上蒸去水溶液上残留的乙酸乙酯(＜1mL)。(必要时，可在此步骤停止分析操作，而放置过夜。)

3.4.1.11 以涡式混匀器将每一试样混匀。同时慢慢加入足量(约0.33g)碳酸钠，加入时间约需1～2 min，以免起泡或结块。用pH计监测pH值，每个试样的pH值应为8～9.5。

3.4.1.12 向每个试样中加入20 mL、甲苯，盖上塞子，平放于试管架上，振摇5 min，取下塞子，于4000 r/min左右将试样离心5 min。

3.4.1.13 尽量完全吸去甲苯相，注意不要带走水相。在35±5℃的水浴上蒸去水相上残留的甲苯(＜1mL)。(必要时可在此步骤停止分析操作，而放置过夜。)

3.4.1.14 对于每一个试样，相对应将一10 mL玻璃注射器(圆柱形推液塞要取下)用夹子固定在环形架上。注射器的路氏接头前端连接SEP-PAK C₁₈柱体。

3.4.1.15 将每支柱用2 mL甲醇预洗，而后用2 mL 0.2M磷酸钾缓冲溶液(pH8.0)洗涤。加入每种试剂后，经过安装于注射器顶部的橡皮塞缓缓通入氮气，利用氮气压力使试剂穿过柱体。当氮气开始出柱时即停气。氮气流速约1～2mL/min。弃去洗脱液。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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