3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取试样20 g(精确到0.1g)于50 mL离心管中，加入30 mL丙酮，均质1 min后，以3000～3500r/min离心5 min，将上清液倒入另一个50 mL离心管中，残留物中加入20 mL丙酮，同样均质离心后合并上清液。残留物中再加入10 mL丙酮，同样均质离心后，合并上清液。

3.4.2 净化

将离心管内的丙酮提取液再离心5 min，将上清液移入分液漏斗，加入3环氯化钠150 mL，混匀，再加入150 mL乙酸乙酯振摇混匀，静置分层后将乙酸乙酯层转移到500 mL烧瓶中；水层溶液再用100 mL, 50 mL乙酸乙酯按上述步骤萃取两次，合并乙酸乙酯萃取液，用旋转蒸发器蒸除其中的溶剂，残留物用5 mL, 3 mL及2 mL乙腈分三次洗入分液漏斗，加入正己烷30 mL，振摇，静置，分层后弃去正己烷，用旋转蒸发器蒸干乙腈层。

3.4.3 乙酯化

在残留物中加入乙酸乙酯0.5mL、乙酸酐0.5 mL及吡啶2滴，混匀后，放置30 min。在反应液中加入水5 mL，混匀。用三氯甲烷提取3次，每次用5 mL，收集三氯甲烷提取液。用水洗涤三次，每次用5 mL水，弃去水层后，在三氯甲烷中加入无水硫酸钠5g摇匀。静置后将溶液注入硅胶柱。用三氯甲烷30 mL洗剩下的硫酸钠，将洗液注入硅胶柱，弃去淋洗液。用甲醇-三氯甲烷(2+8)50mL洗脱，收集洗脱液，用旋转蒸发器蒸发至干，以丙酮0.5mL溶解残留物，供气相色谱测定。

3.4.4 测定

3.4.4.1 色谱条件

a. 色谱柱：玻璃柱，1 m×3 mm(内径)，填充物为2％(m/m)OV-17涂于Chromosorb W HP(80～100目)；

b. 色谱柱温度：280℃；

c．进样口温度：300℃；

d. 检测器温度：300℃；

e．氮气：纯度≥99.99％, 60 mL/min ;

f．氢气：75 mL/min；

g. 空气：100 mL/min。

3.4.4.2 色谱测定

根据样液中甲砜霉素含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中甲砜霉素响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定，在上述色谱条件下，甲砜霉素保留时间约为4.5 min。

3.4.5 空白试验

除不加试样外，按上述测定步骤进行。

3.4.6 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按下列公式计算：

式中：X—试样中甲砜霉素残留量，mg/kg ;

h—样液中兽药的峰高，mm;

h_s—标准工作溶液中兽药的峰高,mm;

c—标准工作溶液中兽药的浓度，ug/mL;

m—称取的试样量，g；

V—样液最终定容体积，mL。

注：计算结果需扣除空白值。

4 方法的测定低限、回收率

4.1 测定低限：0.5 mg/kg,

4.2 回收率

回收率的实验数据：甲砜霉素浓度在0.1～1.0 mg/kg范围，回收率为80％～99％。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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