3.3 仪器和设备

3.3.1 高效液相色谱仪并配备荧光检测器和自动进样设备。

3.3.2 粉碎器。

3.3.3 振荡器。

3.3.4 旋转蒸发器。

3.3.5 溶剂过滤器，附适用有机滤膜。

3.3.6 一次性滤膜0.45 uL。

3.3.7 全玻璃系统重蒸馏装置。

3.3.8 微量注射器：1 uL、10 uL、50uL、100uL

3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取约10.0g(精确至0.1妒试样，黄于250 mL具塞锥形瓶中，加100.0mL提取剂(3.2.10),湿润瓶塞、盖紧、振荡30 min后，以快速定性滤纸过滤于100 mL容量瓶中，用提取剂洗涤滤渣数次。滤液最终定容至100 mL。取定容后的滤液50.0 mL于一分液漏斗内，用石油醚萃取两次(每次用量20 mL)。弃去石油醚层。在乙腈-水层中加20 mL水，用三氯甲烷三次萃取毒素(用量依次为25、15、15 mL)，弃去水层。将三氯甲烷溶液用5％碳酸氢钠溶液萃取三次(每次用量20 mL)，收集水层合并液，并用6 mol/L盐酸调节水溶液pH约1.5后，再用三氯甲烷三次反萃取毒素(用量依次为25、15、15mL)。合并三次三氯甲烷层，并于低温冰箱内(-18℃)冷冻，滤去冰(水)。然后全量移入旋转蒸发器内于30～50℃下蒸干，残渣用乙腈-1.5％乙酸(55+45)溶解，并定容至1.00mL。经0.45um滤膜滤至样品瓶内，供液相色谱仪测定。

3.4.2 测定

3.4.2.1 色谱条件

a．色谱柱：200 mm×2.1mm(内径)，5um ;

b．固定相：Hypersil OD；流动相：乙腈-1.5％乙酸(55+45),经溶剂过滤器抽滤，超声波脱气；

c．流速：0.2 mL/min;

d. 荧光检测器激发波长：333 nm，发射波长：460 nm。

3.4.2.2 色谱测定

待上述工作条件稳定后，分别将标准工作液依次以2uL、4uL、6uL、8uL、10uL自动进样(相当干棕曲霉毒素A0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ng)得到峰面积与进样量的标准工作曲线(在0.2～1.0ng线性范围内)。分别将标准工作液和样液等体积参插进样测定，以外标法定量。上述条件下，棕曲霉毒素A的保留时间约为6.40 min。

3.5 空白试验

不加试样，但用不含棕曲霉毒素A的豆粕粉、玉米粉或菜籽粕粉按上述测定步骤进行。

3.6 结果的计算和表述

用色谱数据处理机或按式(2)计算试样中棕曲霉毒素A的含量：

式中：X—试样中棕曲霉毒素A的含量，ug/kg;

A—样液中棕曲霉毒素A的峰面积，mm²;

A_s—标准工作液中棕曲霉毒素A的峰面积，mm²;

c—标准工作液中棕曲霉毒素A的浓度，ug/mL;

V—样液最终定容体积，mL;

m—最终样液所相当的样品质量，g。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法测定低限为20 ug/kg。

4.2 回收率

回收率实验数据：棕曲霉毒素A添加浓度在20～54 ug/kg范围内，回收率为90.4%～98.9％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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