1．试验中所用的量瓶和移液管均应经检定校正和洗净后使用。

2.使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长处测定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3％以下者可配对使用，否则必须加以校正。

3．取吸收池时，手指拿毛面的两侧。装样品溶液的体积以池体积的4/5为宜，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在吸收池的透光面，可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品架时应注意每次放入的方向相同。使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干，放入专用盒子中防尘保存。吸收池如污染不易洗净时，可用硫酸-发烟硝酸(3：1,V/V)混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。

4．含有杂原子的有机溶剂通常均具有很强的末端吸收，因此当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，应检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白(即空白光路中不置任何物质)测定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度应符合表18-3中的规定。每次测定时应采用同一品牌、同一批号、混合均匀的同批溶剂。

表18-3 以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度规定

5．称量应按《中国药典》规定要求。配制样品溶液时转移稀释次数应尽可能少，转移稀释时所取的容积一般应不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5％以内。进行鉴别或检查时可取样品1份。

6. 供试品溶液的浓度除各品种项下已注明外，供试品溶液的吸光度值以在0.3～0.7为宜，吸光度值读数在此范围内误差较小，并应结合所用仪器吸光度的线性范围，配制合适浓度。

7.选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带的半高宽的1/10，否则测得的吸光度值会偏低或以减小狭缝宽度时供试品溶液的吸光度不再增加为准。对于《中国药典》紫外-可见分光光度法测定的大部分品种，可以使用2nm的缝宽，但当吸收带的半高宽＜20nm时，则应使用较窄的狭缝。

8．除另有规定外，测定时应在规定吸收峰±2nm处，再测几点的吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长作为测定波长。除另有规定外，吸光度最大的波长应在该品种项下规定波长±12nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。

9.由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，囚此测定供试品溶液或对照品溶液的吸光度后应减去空白读数或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。

10．用于制剂含量测定时，应注意供试品溶液与对照品溶液的pH是否一致，如pH对吸收有影响，则应调节溶液的pH一致后再测定吸光度。

11．需要特别明确的是，在检查所用的溶剂是否符合要求时，以空气为空白时，尽管药典中强调了空白光路中不置任何物质，仍有相当多的实验人员认为囚为本项目是检查溶剂，因此两个光路中均应放置比色杯。我们认为药典叙述非常明确地强调了“不置任何物质”，应不存在歧义；而且从1977年版药典对溶剂提出要求后，历版药典一直是这样强调的。

12．应用中造成吸光度测量误差的几个问题

(1)比色皿配对：石英(或玻璃)比色皿本身都有一定的挡光，透过率＜100%，即以空气调100% T,测比色皿的透过率都不到100%T，同时每个比色皿都不可能完全相同，特别是使用一段时间之后，差别更大，因此每次测量前最好检查一下比色皿的透过率。方法是按照测量要求设定好仪器参数，将样品室清空(不放比色皿)，用空气调％T满刻度(%T校零)，然后分别将比色皿装上同一容器内的纯净水，测各比色皿的透过率，如差别＞0.2%T，则比色皿配对不合格或比色皿污染。

(2)暗电流：直接造成光度准确度不好，测定误差大。暗电流包括仪器电路部分固有的电流噪声、光电转换器产生的残存电流、光学系统密封不好，以及样品室密封不好进来的光照到接收器上产生的电流。

(3)影响稳定性的主要因素：光源(电源电压波动1%，钨灯相应波动3％～4%；电源电流波动1%,氘灯相应波动6％～7%)、光电倍增管(电源波动1%，放大后的信号波动12%),温度、湿度、振动和磁场等都会造成仪器稳定性变差。

相关链接：紫外-可见分光测定法

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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