紫外-可见分光光度法在药品分析中的应用范围非常广泛，在药品的检验检测中，主要用于药品的物理常数(吸收系数)测定、鉴别、检查和含量测定。

一、测定法

测定时，一般以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，在规定的吸收峰波长±2nm内测试几个点的吸光度或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除有特殊规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸光度读数以在0.3～0.7为宜。仪器的狭缝波带宽度宜小于供试品吸收带的半高宽度的1/10，否则测得的吸光度会偏低；狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此在测定供试品溶液的吸光度时，常常是将配制供试品溶液的同批溶剂放入配对后的比色池中，由仪器自动扣除空白读数后再测定供试品溶液。

(一)吸收系数

1．性状项下吸收系数的测定按各品种项下规定的方法配制供试品溶液。在规定的波长处测定其吸光度，并计算吸收系数，应符合规定的范围。

2．新品种吸收系数的测定精密称取精制后的样品适量，配制成吸光度在0.6～0.8的溶液，置1cm吸收池中，在规定波长处测出吸光度；然后再用同批溶剂将上述溶液稀释1倍，使吸光度在0.3～0.4，再按上述方法测定。样品应同时测定2份，同一台仪器测定的2份结果对平均值的偏差应不超过±0.3%，否则应重新测定。测定时，先按仪器的正常灵敏度测试，然后再减小狭缝测定，直至减小狭缝吸光值不再增加为止，取吸光度不改变的数据，再用4台不同型号的仪器复测二最后根据朗伯一比尔定律求算出吸收系数。

在测定新品种的吸收系数时，应注意：①样品应为精制品，水分或干燥失重应另取样测定并予以扣除；②所用的容量仪器及分析天平应经过检定，如有相差应加上校正值；③测定所用溶剂的吸光度应符合规定，吸收池应于临用时配对或作空白校正；④称取样品时，其称量准确度应符合《中国药典》规定；⑤所用的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸光度精度要进行校正；⑥要注明测定时的温度。

(二)鉴别

按各品种项下的规定，测定供试品溶液的以下内容：

1．最大吸收波长、最小吸收波长或有无肩峰。

2．最大吸收波长处的吸光度。

3．特定吸收波长下的吸收系数。

4．特定吸收波长下不同吸收峰处的吸光度比值。

5．经化学反应后产物的吸收光谱特性。

上述测定结果均应符合各品种项下的规定。

(三)有关物质(杂质)检查

随着高效液相色谱法的应用和普及，一般情况下，很少有品种采用本法进行杂质限度检查。即使采用本法进行杂质限度检查，也应满意以下条件：

1．该物质本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收。

2．在杂质的吸收峰处该物质无吸收。

(四)含量测定

通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品的吸光度或吸收系数计算出被测物质的含量，主要用于制剂的溶出度检查、含量均匀度检查和含量测定。在目前的药品质量标准中，以溶出度检查项下最为常用。
采用本法进行含量测定的依据是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律，其数学表达式为A=1g(1/T)=Edι。如溶液的浓度(c)为1%(g/ml)、光路长度(ι)为1 cm，相应的吸光度即为吸收系数，以E^1％_1cm表示；如溶液的浓度(c)为摩尔浓度(mol/L)、光路长度为1cm时，则相应的吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。

含量测定法一般采用以下几种方法：

1．对照品比较法按各品种项下规定的方法分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中所含被测成分标示量的100％±10％以内。用同一溶剂，在规定波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度，然后按式18-1计算供试品中被测溶液的浓度：

c_X=(A_X/A_R)c_R                             (式18-1)

式中，e_X为供试品溶液的浓度；A_X为供试品溶液的吸光度；c_R为对照品溶液的浓度；A_R 为对照品溶液的吸光度。

2．吸收系数法按各品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长及该波长±2nm处测定其吸光度，按该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。

用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定；如测定新品种的吸收系数，需按“新品种吸收系数的测定”的规定进行。

3．计算分光光度法按《中国药典》规定，计算分光光度法一般不宜用于含量测定：对少数采用计算分光光度法的品种，应严格按照各品种项下规定的方法进行。采用本法时应注意：有一些吸光度是在待测成分吸收曲线的上升或下降陡坡处测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，尽量使供试品和对照品的测定条件一致。若该品种不用对照品，则应在测定前对仪器做仔细的校正和检定。

4．比色法供试品本身在紫外-可见光区没有强吸收或在紫外光区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，加入适当的显色剂，使反应产物的最大吸收移至可见光区。

用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标准品同时操作。除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。

当吸光度和浓度关系不呈良好的线性时，应取数份梯度量的对照品溶液用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份对照品溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。

5．工作曲线法先配制一系列浓度不同的对照品溶液，在与供试品溶液相同的条件下，分别测定各对照品溶液的吸光度，将各对照品溶液的吸光度对相应的浓度作图，所得的直线称为工作曲线或标准曲线；然后测定供试品溶液的吸光度，再从标准曲线上查出供试品溶液的浓度，进而计算出样品的含量。

此外，紫外-可见吸收光谱也可用于化合物的结构分析，如利用紫外吸收光谱鉴定化合物中的共入结构和芳环结构就有一定的价值。

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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