磷几乎都以磷酸盐的形式存在，它们分为正磷酸盐、缩合磷酸盐(焦磷酸盐、偏磷酸盐和多磷酸盐)和有机结合的磷酸盐。水中的磷含量过高可造成藻类大量繁殖，水体富营养化，使水质变坏。本项任务是应用钼酸铵分光光度法测定水中总磷，首先需要对水样进行消解，在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵、酒石酸锑氧钾反应，生成磷钼杂多酸，被还原剂抗坏血酸还原，则变成蓝色络合物，在波长700nm范围处测量吸光度，用工作曲线法测定未知水样中总磷的含量。在工作曲线的绘制基础上，经讲解了解磷的来源及钼酸铵分光光度法测定总磷的原理，并根据国家环境水质检测的标准方法(钼酸铵分光光度法)对现有水样进行总磷测定，测定过程中严格遵守操作规范并做好数据记录。

一、所用试剂和仪器

1．试剂

(1)配制试剂用水均应为纯水。

(2) 5％过硫酸钾溶液：溶解5g过硫酸钾于水中，稀至100mL纯水中。

(3)硫酸：1：1

(4) 10％抗坏血酸溶液：溶解10g抗坏血酸于纯水中，稀释至100mL。该溶液贮于棕色玻璃瓶中，冷处存放。如颜色变黄，弃去重配。

(5)钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵[(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O]于100mL水中。溶解0.35g酒石酸锑氧钾[K(SbO)C₄H₄O₆·1/2H₂O]于100mL纯水中。

搅拌下，将钼酸铵溶液缓缓倒入300mL(1：1)硫酸中，再加入酒石酸锑氧钾溶液混匀。试剂贮存在棕色玻璃瓶中，稳定2个月。

(6)磷酸盐贮备液：称取于110℃干燥2h的磷酸二氢钾0.2197g溶于纯水，转移入1000mL容量瓶中，加(1:1)硫酸5ml，用纯水稀至标线。此溶液每毫升含50.0ug磷。

(7)磷酸盐标准溶液：吸取10.00ml磷酸盐贮备液于250mL容量瓶中，用纯水稀至标线。此标准溶液每毫升含2.00ug磷。

2．仪器

(1)分光光度计：721型。

(2)医用手提式高压蒸汽消毒器(1～1.5kg/m³)(带调压器)。

(3)具塞比色管：50mL，成套高型无色。

(4)纱布、细绳。

(5)比色皿：光程30mm。

(6)移液管：5、10、50mL。

(7)容量瓶：250、1000mL。

(8)分析天平：精度±0.0001g。

(9)洗耳球。

二、注意事项

(l)如室温低于13℃，可在20～30℃水浴显色15min。

(2)色度会干扰吸光度的正确读取，需做补偿校正。

(3)比色皿用后可用稀硝酸洗液浸泡片刻，以除去吸附的钼蓝有色物。

(4)当砷含量大于2mg/L，硫化物含量大于2mg/L，六价铬含量大于50mg/L，亚硝酸盐含量大于1mg/L时有干扰，应设法消除。

[任务实施]

一、水样的消解

二、工作曲线的绘制

1．工作液的配制：吸取0、0.50、1.00、3.00、5.00、10.0和15.0mL磷酸盐标准溶液于50mL具塞比色管中，加纯水至标线。

2．显色：向比色管加1.0mL10％抗坏血酸溶液，摇匀。30秒后加2.0mL钼酸盐溶液，摇匀。放置15分钟。

3．比色测量：在波长700nm处，用光程10mm或30mm比色皿，以纯水为参比，读取吸光度。

4．工作曲线的绘制：绘制以总磷含量对吸光度的工作曲线。

三、水样的测定

1．取样：取适量经消解的水样(含磷量不超过30ug)，加入50mL比色管中，纯水稀释至标线。

2．显色：向比色管加1.0mL10％抗坏血酸溶液，摇匀。30s后加2.0mL钼酸盐溶液，摇匀。放置15分钟。

3．比色测量：在波长700nm处，用光程10mm或30mm比色皿，以纯水为参比，读取吸光度。

四、数据记录

记录各工作液及水样的吸光度。

五、总磷含量的计算：

式中：m—由工作曲线上查得总磷含量，单位为微克(ug) ;

V—水样的体积，单位为毫升(mL)。