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志贺菌属微生物学检验

发布时间:2017-08-30 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:2431

1.鉴定程序志贺菌鉴定程序见图16-3。

图16-3志贺菌检验程序

2.标本采集最好治疗前采集黏液脓血便,如不能及时接种,需置于甘油保存液或卡-布运送培养基运送,必要时采集肛拭子。

3.标本直接检查可用胶乳凝集试验和免疫荧光技术检测抗原,也可以直接检测核酸。

4.分离培养 将黏液脓血便或肛拭子接种于肠道鉴别选择培养基(MACMEB或SS),志贺菌在上述培养基上形成无色或淡黄色菌落。也可用木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐培养基(XLD),志贺菌在其上形成红色菌落。

5.鉴定

(1)初步鉴定:取MAC/E11IB,SS培养基上的无色菌落或XLD培养基上的红色菌落,如革兰染色镜检为革兰阴性杆菌,氧化酶试验阴性,参见表16-2确定为肠杆菌科细菌苯丙氨酸脱氨酶试验、VP试验阴性与其他菌属的鉴别见表16-9。志贺菌属的细菌应符合表

16-11所列的生化反应。

①志贺菌属与大肠埃希菌鉴别:志贺菌属动力阴性,赖氨酸脱羧酶阴性,见表16-12。

②志贺菌属与伤寒沙门菌鉴别:志贺菌属和伤寒沙门菌都发酵葡萄糖产酸不产气,但伤寒沙门菌动力阳性,硫化氢多阳性,与沙门菌诊断血清凝集。

③志贺菌属与类志贺临一单胞菌鉴别:志贺菌属动力和氧化酶均阴性,而类志贺临单胞菌均为阳性。

表16-11志贺菌属生化反应

注:d表示26%~75%阳性;(一)表示11%~25%阳性;(d)表示迟缓阳性,72 h以上。

表16-12志贺菌与大肠埃希菌鉴别

注:+表示90%以上阳性;一表示90%以上阴性;d表示26%~75%阳性。

(2)最终鉴定:依全面生化反应及血清学试验作出最终鉴定。生化反应确定到志贺菌属后,继续做血清学试验鉴定到群、型(表16-10)。先与志贺菌属多价诊断血清(A群1,2型、B群1~6型、C群1~6型及D群)做玻片凝集试验,凝集者进一步做群、型鉴定。我国各地报告的志贺菌属感染以B群为多,占总数的70%以上,其次为D群及A群2型。在B群中又以1b,2a及3型居多。

应注意的是,偶可出现生化反应符合志贺菌,与志贺菌血清并不凝的现象,应制成浓厚菌悬液隔水加热(100℃15~30 min),再重新做凝集试验。

(3)非典型菌株:如生化反应符合志贺菌属,而诊断血清凝集试验阴性;或生化反应不典型,而诊断血清凝集试验阳性。可做以下处理,将非典型菌株在普通琼脂和肉汤中交替传代5~10次,可恢复其典型性状。若传代后生化反应典型但仍不与诊断血清凝集者,可报告“生化反应似志贺菌属,但血清凝集阴性”。由临床医师结合患者情况及流行病学特点,确定其临床意义。

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