抗真菌药物分为三类：①多烯类，如两性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等，主要通过作用于真菌细胞膜上的麦角甾醇产生抗菌作用；②吡咯类，如酮康唑、伊曲康唑,氟康唑、克霉唑、益康唑等，通过抑制麦角甾醇的生物合成而产生抗菌作用；③氟化嘧啶类，如5-氟胞嘧啶。近年来耐药的真菌株菌逐渐增多，对氟化嘧啶的耐药较常见，而对两性霉素B的耐药少见，因此，通常不单独使用氟化嘧啶治疗真菌感染，而是常与两性霉素B联用。

真菌包括酵母样真菌和丝状菌，前者感染率高于后者，故在此介绍酵母样真菌的药敏试验。进行酵母样真菌的药敏试验的指征一有：①菌株分离自严重的全身性感染患者、白细胞减少的艾滋病患者、肿瘤患者和器官移植患者；②调整毒性较大的药物剂量，如两性霉素B;③需要长期用药以监测耐药性变化的患者。其方法有纸片扩散法、肉汤稀释法和E-试验。纸片扩散法可用于检测真菌对氟化嘧啶和氟康唑的敏感性，结果需用MIC法证实，只能用干耐药性的筛选。E-试验操作简便，结果准确，可直接从平板上区分污染菌落，但成本较高。

一、常量肉汤稀释法

1．培养基和药液培养基采用含谷氨酰胺和pH指示剂、不含碳酸氢钠的RPMI 1640培养基。药物原液浓度为16000 ug/mL，用1640培养基将待测抗真菌药物进行连续稀释，稀释后的浓度为待测浓度的10倍，分别加入试管，每管0.1 mL。

2．接种菌液 受试菌接种于沙保氏培养基3 5℃培养24 h（如假丝酵母菌）或48 h(如隐球菌）至少传代2次，以确保纯培养。挑取5个直径大于或等干1 mm的菌落混悬干5 mL的生理盐水，调整至0.5麦氏比浊单位，为1～5×10³CFU/mL；先用生理盐水稀释100倍，再用1640培养基稀释10倍，稀释使其终浓度为1～5×10³ CFU/mL。取0.9 mL菌液加入含有0.1 mL稀释药液的试管中，同时设置生长对照管（有菌无药）和阴性对照管（无菌无药），混匀后35℃培养48 h。

3．结果判读 观察各管生长情况，两性霉素B的MIC为肉眼可见抑制受试菌生长的最低浓度，5-氟胞嘧啶和吡咯类通常采用80％MIC判断标准，即抑制80％受试菌生长的最低浓度作为MIC。取无药生长对照管中的菌液0.2 ml加入含有0.8 mL培养基的试管中，混匀后作为80％受试菌抑制的比浊标准。

4．质量控制包括培养基质量，抗菌药物效价和称量的准确性、配制和保存方法，试验操作的质量和对照等，最主要的是每批次采用质控菌株，其MIC应在预期值范围内。常用质控菌株有近平滑假丝酵母菌ATCC22019和ATCC90018、克柔假丝酵母菌ATCC6258、白假丝酵母菌ATCC9028和ATCC90029、光滑球拟酵母菌ATCC90030、新生隐球菌ATCC90112和ATCC90113。

二、微量肉汤稀释法

培养基和药液、接种菌液、结果判断和质量控制基本与常量肉汤稀释法相同。用无菌塑料微孔板进行培养，每排1～10孔中加入100 uL系列稀释的药液，同时设置1孔无菌空白对照和1孔有菌无药的生长阳性对照，每次需做双份测定。将10 uL受试菌液接种于各孔内，使其终浓度为1×10³CFU/mL，然后置于塑料湿盒35℃孵育24 h和48 h。同常量肉汤稀释法，吡咯类药物也采用80％MIC判断标准。