(1)形态学特征：神经干细胞经过一段时间的分化培养，其中星形胶质细胞比例越来越大，而神经元和少突胶质细胞比例不断下降；待到细胞长满瓶底时，镜下观察表层主要为少突角质细胞，表现为胞体较小，呈圆形或多角形，细胞核比例较大，呈圆形且颜色较深，突起细长并彼此连接成胶质网络；底层主要为星形胶质细胞，其胞体相对较大，形状不规则，胞质较丰富，细胞核呈圆形或卵圆形常位于胞体的一侧，内有1～2个核仁。

(2）化学标志物：胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）是星形胶质细胞特有的蛋白质，主要位于星形胶质细胞的胞质和突起内，是其特异性的分子标志物。可采用髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein, MBP）作为少突胶质细胞的标志物。

1. MTT法 选取第2代生长良好的神经干细胞以0.5x10⁴/ml的密度接种于预先用0.1% PLL包被过的96孔板中，37℃,5% C0₂条件下培养24小时后给予相应的药物处理。给药4天后加入0.125% MTT (20微升／孔）,4小时后加入10％的SDS(100微升／孔），待蓝色颗粒充分溶解后（约12～16小时），用分光光度计测定标本在570nm处的光吸收值，记录实验结果。

2. CCK-8法细胞培养及药物处理同MIT法。药物培养4天后，直接往96孔板每孔加入10ul CCK-8试剂，继续培养1～4小时，用分光光度计测定标本在450nm处的光吸收值，记录实验结果。

3.³ H-TdR掺入法细胞培养及药物处理同MTT法。药物培养72小时后，直接往96孔板中加入3 H-TdR（终浓度1.85x104Bq/L) ,37℃孵育24小时后终止，用预冷的PBS冲洗3遍，4℃的10％三氯醋酸冲洗2遍，加入0.2mo1/L NaOH (100微升／孔），超声15分钟后，吸出90ul裂解液加到1 ml闪烁液中，室温过夜，次日计数放射液闪值（cpm )。以刺激指数(stimulate Index,IS）为指标衡量药物的作用：

4．免疫细胞化学法将培养板中的玻片取出，用多聚甲醛室温固定30分钟，5％血清37℃封闭30分钟，应用兔抗NSE抗体（1 : 400，根据抗体的具体要求）和兔抗GFAP抗体(1:100)37℃孵育2小时，PBS洗3遍，FITC标记的羊抗兔IgG+TRITC标记的羊抗兔IgG(1:50)37℃孵育1小时，PBS洗3遍，然后用Hoechst33342染核，洗净后90％甘油PBS封片。在荧光显微镜下，在培养盖玻片上随机选取5～8个视野（总数约600～800个细胞），分别计数各视野的Hoechst33342（计细胞总数）阳性细胞数，NSE和GFAP阳性细胞数，分别计算分化百分率：

神经元分化百分率（％）=（每片各视野NSE阳性细胞数之和／每片视野的Hoechst33342阳性细胞数之和）x100

星形胶质细胞分化百分率（％）=（每片各视野GFAP阳性细胞数之和／每片视野的Ho-echst33342阳性细胞数之和）x100

【注意事项】

1．多聚赖氨酸铺板方法将工作浓度的多聚赖氨酸加入培养皿，加入的量视器皿大小而定。一般来说，能够湿润或覆盖住培养器皿的生长面即可。包被时间为37℃ 2～4小时或室温下静置过夜。吸去多聚赖氨酸，用无菌三蒸水洗涤培养皿数次，接种细胞前用培养液洗涤培养皿一次。

2．由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置7天即可分解50%。培养液在4℃放置2周以上时，需要重新加入原来量的谷氨酰胺，故需单独配制谷氨酰胺溶液，以便临用时加入培养液内。

3．本实验采用无血清限定性培养，此培养条件只适合神经干细胞增殖，不适合其他类型细胞的存活和增殖，如神经元和神经胶质细胞，它们将随着培养时间的延长而死亡。

4．神经干细胞的自我分生能力可用溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine, BrdU ;为胸苷类似物，可与细胞有丝分裂期DNA稳定结合，是研究细胞分裂的标记物）标记分裂中的干细胞，以免疫细胞化学法检测。