血管性血友病因子（vWF）由内皮细胞和骨髓巨核细胞合成，内皮细胞中的vWF贮存在Weibel Palade小体中。当内皮细胞受到刺激时，vWF能够从Weibel Palade小体分泌到血浆或血管内皮下，vWF的主要生理功能是促进血小板在内皮下的黏附及保护凝血因子珊不被降解。

vWF的测定可采用固相化的抗 vWF单克隆抗体与vWF结合，然后加入辣根过氧化酶标记的另一株单抗与固相化的vWF结合，加入底物，显色后测定光吸收，由标准曲线计算样品中的vWF含量。

【材料】

1．体外培养的血管内皮细胞。

2．抗凝剂枸橼酸钠。

3．平衡缓冲液（20mmol/L Tris-HCL,0.15mol/L NaCl, 1mmol/L苯甲脒,0.2% NP40,pH 7.4)；洗脱液（20mmol/L Tris-HCI, 2mo1/L NaSCN, 0.2% NP40, pH 7.4)；缓冲液(50mmol/L Tris-HC1,0.1mol/L NaCI,3mmol/L CaC1₂,0.1％BSA,pH 7.5）。

4．酶标仪、透析袋。

【方法】

1．制备标本制备内皮细胞培养液或血浆。

2．测定步骤用兔抗人vWF单抗包被微孔板，200微升/孔,25ug/ml,37℃温浴3小时，置4℃冰箱过夜。第2天吸去孔内液体，用含0.05％吐温20的PBS(pH7.4)洗4次后，将样品用含0.2％牛血清清蛋白（BSA）的PBS稀释100倍后加入孔中，每孔200ul，同时作标准曲线（以20～50个正常人混合的血浆做标准品，用含0.2% BSA的PBS将混合血浆稀释成1:50,1：100,1：200,1 :500,1：1000等五个浓度）。37℃温育1小时，去上清液，洗3次。每孔加入200ul辣根过氧化酶(HRP）标记的抗vWF单克隆抗体，37℃孵育1小时。去上清液，洗板3次，加入200ul底物（底物为溶于0.1 mol/L pH 4.6的枸橼酸钠缓冲液中的0.1％的邻苯二胺，临用前每l0ml底物中加入50ul的3％的H₂0₂)，37℃避光反应15小时，各孔滴加50ul浓硫酸终止反应，于492nm波长测OD值。

【结果与分析】

此方法简便、易行，结果稳定、重现性好。可用于研究内皮细胞的功能，药物的效能并可作心肌梗死、心绞痛、脑血管病变等的辅助诊断。应注意不同血型的人vWF ; Ag正常值相差很大，有人报道，AB型者最高，平均为123.3，其次为B型及A型。0型者最低，为74.8。

【注意事项】

1．血样采集后，应尽快测定，或置-20℃冰箱保存于1周内完成测定。

2．因为以稀释的正常人血浆为标准品，故待测样品应稀释100倍后再测定。