乳腺主要由腺上皮组成。乳腺癌的细胞系模型直接来源于人类乳腺肿瘤的上皮细胞。临床手术获得的乳腺癌组织，需首先尽可能剔除脂肪组织，因组织中含纤维组织较多，可用胶原酶消化法获取细胞。

【材料】

1．乳腺癌实体组织。

2. PBS含100U/ml青霉素、200ug/ml链霉素、5ug/ml两性霉素B。

3. DMEM加100U/ml青霉素、100 ug/ml链霉素、2mmol/L谷氨酰胺、1Ommol/L HEPES,0.075％牛血清清蛋白（BSA),lOng/ml霍乱毒素、0.5ug/ml氢化可的松、5ug/ml胰岛素和5ng/ml EGF，或含10％胎牛血清。

4．眼科剪刀、眼科镊子、玻璃吸管、离心管、培养瓶。

【方法】

1．取乳腺癌组织，用无Ca²⁺和Mg²⁺但添加青霉素、链霉素和两性霉素B的PBS缓冲液充分冲洗该组织。用眼科剪刀剪碎组织。再用PBS冲洗2次。

2．将洗净的乳腺癌组织块用0.1 % Ⅲ型胶原酶在37℃培养箱中消化分离18～20小时。

3．取出经消化的组织，用力振荡，使残留的仅部分消化的大块组织分离，用500r/min,离心1分钟。

4．小心移出上清液置于新试管。团块中含有单个的细胞和部分消化的小的组织碎片，称之为器官样组分。

5．保留团块并加入5～10m1 PBS，使之再悬浮，将上清液800r/min再离心2分钟。移出上清液置于新试管，团块中含有上皮细胞组分。加5～10ml PBS使之再悬浮。

6．将上清液1000r/min再次离心5分钟，移出上清液（不保留）。团块中含有成纤维细胞组分，保留并加入10m1 PBS再悬浮。

7．根据离心分离出的三种成分。器官样组分和上皮样组分用不含血清的DMEM培养基制成细胞悬液后接种培养；成纤维细胞组分，在含10％胎牛血清的DMEM培养基中接种培养。

【结果】

上皮细胞群倍增时间大概在3～6天之间，大多数情况下细胞在21天生长达平台期。用锥虫蓝染色法检测，刚培养时细胞活力大约为94％～97％，体外培养21天后变为80%～85%。有实验研究证实，体外培养至6～8周时，仍然保持表型和基因型的稳定。所以乳腺癌细胞长时间培养是可能的。细胞体外培养3～5天后，可对培养细胞的表型进行鉴定，主要通过免疫染色标记角蛋白，确定上皮细胞表型。或者对分离后的细胞进行流式细胞分选，确定细胞的恶性来源。

【注意事项】

接种细胞前，可在培养瓶底部铺以胶原层，利于腺细胞生长。消化过程可置恒温摇床振荡消化，使组织消化充分。我们试验了多种胶原酶，发现RI型胶原酶细胞产量高，且不损失细胞的活性。分离出的器官样组分和上皮样组分在培养时，为减少成纤维细胞的混杂，采用不含胎牛血清的培养基进行培养。