7 测定步骤

7.1 提取

取试料5g（准确至士20mg），于50mL塑料离心管中加入乙腈20mL，于涡旋振荡器上以2000r/min涡旋1min，超声5min，以3500r/min离心6min，取上清液转移至另一离心管中，残渣再加乙腈15mL，重复提取一次，合并上清液，备用。

7.2 净化

中性氧化铝固相萃取柱预先用乙腈5mL活化，取备用液过柱，用乙腈5mL洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中，加入异丙醇4mL，40°C旋转蒸发至干。精密加入定容液2mL溶解残余物，加乙腈饱和正己烷2mL，转至10mL离心管中，涡旋10s，以3000r/min离心8min，取下层清液过0.22滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3 基质匹配标准曲线的制备

精密量取混合标准工作液适量，用空白样品提取液溶解稀释，配制成大环内酯类药物浓度为1ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL的系列基质标准工作溶液；现配现用。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、以标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.4 测定

7.4.1 液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18色谱柱（150mmX2.0mm，5μm）或相当者；

b）流动相：A为0.1%的甲酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱条件见表1；

c）流速：0.2mL/min；

d）柱温：30°C；

e）进样量：10μL。

7.4.2 质谱参考条件

a）离子源：电喷雾（ESI）离子源；

b）扫描方式：正离子扫描；

c）检测方式：多反应监测；

d）喷雾电压：4000V；

e）离子传输毛细管温度：350°C；

f）雾化气压力：248kPa；

g）辅助气压力：48kPa；

h）定性离子对、定量离子对和碰撞能量见表2。

7.4.3 测定法

7.4.3.1 定性测定

在同样测试条件下，试样溶液中大环内酯类药物的保留时间与标准工作液中大环内酯类药物的保留时间之比，偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3要求。

 

时间之比，偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3要求。

7.4.3.2 定量测定

按7.4.1和7.4.2设定仪器条件，以基质标准工作溶液浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，作单点或多点校准，按外标法计算试样中药物的残留量，定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片。标准溶液特征离子质量色谱图参见附录B。

7.5 空白试验

除不加试料外，均按上述测定步骤进行。

8 结果计算和表述

试样中待测药物的残留量按式（1）计算。

式中：

X——试样中被测组分的残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；

Cs——标准工作液测得的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

A——试样溶液中被测组分峰面积；

As——标准工作液被测组分峰面积；

V——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试料质量，单位为克（g）。

计算结果需扣除空白值。测定结果用2次平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。

9 方法灵敏度、准确度和精密度

9.1 灵敏度

本方法的检测限为1.0μg/kg；红霉素、替米考星定量限为2.0μg/kg，竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素定量限为4.0μg/kg。

9.2 准确度

红霉素、替米考星在2.0μg/kg〜40μg/kg添加浓度的回收率为70%〜120%；竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素在4.0μg/kg〜40μg/kg添加浓度的回收率为70%〜120%。

9.3 精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。

 

 

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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