1 范围

本标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿(leucomalachite green)、结晶紫及其代谢物隐色结晶紫(leucocrystal violet)残留量的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱的测定方法。

本标准适用于鲜活水产品及其制品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色结 晶紫残留量的检验。

2 液相色谱-串联质谱法

2. 1 原理

试样中的残留物用乙月青-乙酸铉缓冲溶液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷层，经中性氧 化铝和阳离子固相柱净化后用液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。

2.2 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

2.2. 1 乙腈：液相色谱纯。

2.2.2 甲醇：液相色谱纯。

2.2.3 二氯甲烷。

2.2.4 无水乙酸铵。

2.2.5 5 mol/L乙酸铵缓冲溶液：称取38. 5 g无水乙酸铵溶解于90 mL水中，冰乙酸调pH到7. 0，用 水定容至100 mL。

2.2.6 0.1 mol/L乙酸铵缓冲溶液：称取7.71 g无水乙酸铵溶解于1 000 mL水中，冰乙酸调pH到 4.5。

2.2.7 5 mmol/L乙酸铵缓冲溶液：称取0. 385 g无水乙酸铵溶解于1 000 mL水中，冰乙酸调pH到 4. 5，过 0. 2 μm 滤膜。

2.2.8 冰乙酸。

2. 2. 9  0. 25 g/mL盐酸羟胺溶液。

2.2.10  1. 0 mol/L对-甲苯磺酸溶液：称取17.2 gM-甲苯磺酸，用水溶解并定容至100 mL。

2.2. 11 体积分数为2%的甲酸溶液。

2. 2. 12 体积分数为5%的乙酸铵甲醇溶液：量取5 mL乙酸铵缓冲溶液(2. 2. 5)用甲醇定容至100 mL。

2.2.13 阳离子交换柱：MCX，60 mg/3 mL，使用前依次用3 mL乙腈、3 mL甲酸溶液(2. 2. 11) 活化。

2. 2.14 中性氧化铝柱：1 g/3 mL，使用前用5 mL乙腈活化。

2.2.15 标准品：孔雀石绿(MG)、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结晶紫(LCV)、同位素内标氘代孔雀石绿(Ds-MG)、同位素内标氘代隐色孔雀石绿(D6-LMG)，纯度大于98%。

2.2.16 标准储备溶液：准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、氘代孔雀石绿、 氘代隐色孔雀石绿标准品，用乙腈分别配制成100μg/mL的标准储备液。

2.2.17 混合标准储备溶液(1 μg/mL)：分别准确吸取1.00 mL孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的标准储备溶液(2. 2. 16)至100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，1 mL该溶液分别含1μg的孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫。一18°C避光保存。

2.2.18 混合标准储备溶液(100 ng/mL):用乙腈稀释混合标准储备溶液(2. 2.17)，配制成每毫升含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫均为100 ng的混合标准储备溶液。一18°C避光保存。

2.2.19 混合内标标准溶液：用乙睛稀释标准溶液(2. 2.16)，配制成每毫升含氘代孔雀石绿和氘代隐色孔雀石绿各100 ng的内标混合溶液。一18°C避光保存。

2.2.20 混合标准工作溶液：根据需要，临用时吸取一定量的混合标准储备溶液(2. 2.18)和混合内标标准溶液(2. 2.19)，用乙腈+ 5 mmol/L乙酸铉溶液(1 + 1)稀释配制适当浓度的混合标准工作液，每毫升该混合标准工作溶液含有氘代孔雀石绿和氘代隐色孔雀石绿各2 ng。

2.3 仪器和设备

2.3.1 高效液相色谱-串联质谱联用仪:配有电喷雾(ESI)离子源

2.3.2 匀浆机

2. 3. 3 离心机：4 000 r/min

2.3.4 超声波水浴

2.3.5 涡旋振荡器

2.3.6 KD 浓缩瓶：25 mL

2.3.7 固相萃取装置

2.3.8 旋转蒸发仪

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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