一、实训目标

1．掌握高效液相色谱法测定青霉素钠含量的方法；

2．熟悉高效液相色谱仪的使用方法。

二、实训原理

高效液相色谱法是目前应用较广的检测技术。其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注人装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

三、实训仪器与试剂

1．仪器

高效液相色谱仪LC-1000;N2000色谱工作站；C18键合硅胶色谱柱（200mm×04.6mm)。

2．试剂
乙腈（色谱纯）；高纯水；磷酸二氢钾（A.R.);磷酸（A.R.);2-苯乙酰胺（对照品）；青霉素（对照品）；流动相：0.lmol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH在2.5)-乙腈(70：30)。

四、实训步骤

1．色谱条件与系统适用性试验

2．测定方法

取本品内容物适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液，摇匀，精密量取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

另取青霉素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，其结果乘以1.0658，即为供试品中C16H17N2NaO4S的含量。每lmg的C16H17N2NaO4S相当于1670U青霉素。

ρi=ρs(Ai/As)

式中ρi——试液中组分i的质量浓度；

ρs——标准溶液中组分i的质量浓度；

Ai——试液中组分i的峰值；

As——标准溶液中组分i的峰值。

按无水物计算，含C16H17N2NaO4S不得少于96.0%；按平均装量计算，含C16H17N2NaO4S应为标示量的95.0%-115.0%。

五、注意事项

(1)有青霉素过敏史者不得参加本实验。指导教师应高度注意个别学生的过敏反应，并做好必要准备，以防事故发生。

(2)因为流动相为含缓冲盐的流动相，所以在运行前应先用色谱用水平衡色谱柱，然后
再走流动相，而且流速应逐步升到1mL/min。在检测完毕后，应再用色谱用水洗色谱柱30min以上，然后用甲醇：水（(50:50)或其他合适的流动相饱和色谱柱。

(3)流动相使用之前应过滤、脱气。