一、实训目标

1．学会胶囊类样品预处理的方法；

2．掌握流动相pH的调节方法；

3．能用外标法对样品中主成分进行定性定量检测；

4．掌握HPLC在药物分析中的应用。

二、实训原理

高效液相色谱法是目前应用较广的药物检测技术。其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

三、实训仪器与试剂

1．仪器

PE200型高效液相色谱仪或其他型号液相色谱仪（普通配置，带紫外检测器）；TC4色谱工作站或其他色谱工作站；色谱柱：PEBrownleeCl8反相键合相色谱柱（5μm，4.6mmi.d.×150mm);100μL平头微量注射器；超声波清洗器；流动相过滤器；无油真空泵。

2．试剂

布洛芬对照品；布洛芬胶囊；醋酸钠缓冲液；蒸馏水；乙腈。

四、实训步骤

1．流动相的预处理

配制醋酸钠缓冲液（取醋酸钠6.13g，加水750mL，振摇使溶解，用冰醋酸调节pH=2.5)，流动相为醋酸钠缓冲液-乙腈(40：60)，用0.45μm有机相滤膜减压过滤，脱气。

2．对照品溶液的配制

准确称取0.1g布洛芬对照品（精确至0.lmg)，置200mL容量瓶中，加甲醇100mL溶解，振摇30min，加水稀释至刻度，摇匀，过滤。

3．试样的处理与制备

取一定量市售布洛芬胶囊，用干净小刀割破胶丸，倒出里面的粉末，用研钵研细并混合均匀后，准确称取适量样品粉末（约相当于布洛芬0.1g)，置于200mL容量瓶中，加甲醇100mL溶解，振摇30min，加水稀释至刻度，摇匀，过滤。

4．标样分析

(1)将色谱柱安装在色谱仪上，将流动相更换成已处理过的醋酸钠-乙腈(40：60)。

(2)按规范步骤开机，并将仪器调试至正常工作状态，流动相流速设置为1.0mL/min;柱温30-40℃;紫外检测器检测波长263nm。

(3)布洛芬对照品溶液的分析测定待仪器基线稳定后，用100μL平头微量注射器分别注射布洛芬对照品溶液100μL（实际进样量以定量管体积计），记录下样品名对应的文件名。平行测定三次。

5．定性鉴定

将布洛芬胶囊样品溶液的分离色谱图与布洛芬对照品溶液的分离色谱图进行保留时间的比较即可确认布洛芬胶囊样品的主成分色谱峰的位置。

6．结束工作

(1)所有样品分析完毕后，先用蒸馏水清洗色谱系统30min以上，然后用100％的乙腈溶液清洗色谱系统20-30min，再按正常的步骤关机。

(2)清理台面，填写仪器使用记录。

7．数据处理

记录色谱操作条件并参照下表记录布洛芬胶囊测定的相关实验数据，计算布洛芬胶囊中主成分的质量分数或质量浓度。

五、注意事项

(1)由于流动相为含缓冲盐的流动相，所以在运行前应先用蒸馏水平衡色谱柱，然后再走流动相，且流速应逐步升到1.0mL/min。实验完毕后，应再用纯水冲洗色谱柱30min以上，然后用甲醇一水（(85：15）或其他合适的流动相冲洗色谱柱。

(2)色谱柱的个体差异很大，即使是同一厂家的同种型号的色谱柱，性能也会有差异。因此，色谱条件（主要是指流动相的配比）应根据所用色谱柱的实际情况作适当的调整。