一、实训目标

1．了解气相色谱仪的基本结构、工作原理与操作技术；

2．了解石墨炉原子化器工作原理和使用方法；

3．学习生化样品的分析方法。

二、实训原理

在常规分析中火焰原子吸收法应用较广，但由于它雾化效率低；火焰气体的稀释使火焰中原子浓度降低；高速燃烧使基态原子在吸收区停留时间短等原因，使该方法灵敏度受到限制。火焰法至少需要0.5-1.0mL试液，对试样较少的样品，分析产生困难。高温石墨炉原子吸收法是一种非火焰原子吸收光谱法，它是目前发展最快、应用最多的一门技术。

在石墨炉中的工作步骤可分为干燥、灰化、原子化和除残渣4个阶段。“高温石墨炉”利用高温（约3000℃）石墨管，使试样完全蒸发、充分原子化，试样利用率几乎达100%,自由原子在吸收区停留时间长，故灵敏度比火焰法高100-1000倍（10-14g)。试样用量仅5-100μL，而且可以直接分析悬浮液和固体样品。它的缺点是干扰大，必须进行背景扣除，且操作比火焰法复杂。

用“高温石墨炉”法测定血清中痕量元素，灵敏度高、用样量少。为了消除基体干扰，采用标准加入法或配制于葡萄糖溶液中的系列标准溶液。

三、实训仪器与试剂

1．仪器

AA-300型原子吸收分光光度计；Cr空心阴极灯；Ar气钢瓶；乙炔气钢瓶；石墨管；微量注射器；容量瓶（1000mL1只、50mL10只）。

2．试剂

20%(W/V)葡聚糖溶液；0.1000mg/mL铬标准贮备液：称取0.3735gK2Cr2O7（经150℃干燥）溶于去离子水中，并定容于1000mL容量瓶。

四、实训步骤

1．系列标准溶液的配制

(1)由0.1000mg/mLCr的贮备液逐级稀释成0.100μg/mLCr的标准溶液。

(2）在5个50mL容量瓶中分别加入0.100μg/mLCr的标准溶液0.0mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL和葡聚糖溶液15mL，用去离子水稀至刻度，摇匀，备用。

2．血清的制备

采取血液样品2mL，因获得的血液不能抗凝，将其盛于离心管或可以离心的器皿中，静置或置于37℃环境中，促其凝固，待血液凝固后，将其平衡后离心（一般为3000r/min,离心5-10min)，得到的上清液即为血清，可小心将上清液吸出（注意切勿吸出细胞成分），采取血清样品2mL，分装备用。

3．设置测量条件

按仪器操作方法，启动仪器，并预热20min，开启冷却水和保护气体开关。

4．测量

(1)调好仪器的实验参数，自动升温空烧石墨管调零。进行背景校正。

(2)绘制标准工作曲线以试剂空白作参比溶液，然后从稀至浓逐个测量空白溶液和系列标准样品，每个溶液测定3次，取平均值。

（3）血清样品测定在相同实验条件下，测量血清样品三次，取平均值。

5．结束

实验结束时，按操作要求，关好气源和电源，并将仪器关好、旋钮至子初始位置。

6．数据处理

(1)以吸收光度值为纵坐标、铬含量为横坐标制作标准曲线。

(2)从标准曲线中，由血清试样的吸光度查出相应的铬含量。

(3)计算血清中铬的含量（μg/mL)。

五、注意事项

(1)实验前应仔细了解仪器的构造及操作，以便实验能顺利进行。

(2)实验前应检查通风是否良好，确保试样中产生的废气排出室外。

(3)注意用气用电安全，要严格按教师指导进行实验。