一、实训目标

1．能应用紫外分光光度法对有机物进行定性与定量分析；

2．熟练掌握紫外一可见分光光度计的使用。

二、实训原理

不同的有机化合物具有不同的吸收光谱，因此根据化合物的紫外吸收光谱中特征吸收峰的波长和强度可以进行物质的鉴定和纯度的检查。

紫外吸收光谱定性分析一般采用比较光谱法。所谓比较光谱法是将经提纯的样品和标准物用相同溶剂配成溶液，并在相同条件下绘制吸收光谱曲线，比较其吸收光谱是否一致。如果紫外吸收光谱曲线完全相同（包括曲线形状、λmax、λmin、吸收峰数目、拐点及εmax等），则可初步认为是同一种化合物。为了进一步确认可更换另一种溶剂重新测定后再作比较。本试验通过比较有机物的紫外吸收光谱曲线进行试样的定性分析。

紫外分光光度法定量分析与可见分光光度法定量分析的定量依据和定量方法相同，在进行紫外定量分析时应选择好测定波长和溶剂。通常情况下一般选择λmax作测定波长，若在λmax处共存的其他物质也有吸收，则应另选ε较大、而共存物质没有吸收的波长作测定波长。选择溶剂时要注意所用溶剂在测定波长处应没有明显的吸收，而且对被测物溶解性要好，不和被测物发生作用，不含干扰测定的物质。配制合适浓度的标准溶液绘制工作曲线进行样品的定量分析。

三、实训仪器与试剂

1．仪器

紫外一可见分光光度计；石英吸收池一对；容量瓶；移液管。

2．试剂

①无水乙醇(A.R.);

②标准贮备液：对硝基苯酚（配制成lmg/mL乙醇溶液）、硝基苯（配制成lmg/mL乙醇溶液）、维生素C（配制成lmg/mL乙醇溶液）；

③试样溶液（其溶剂为乙醇，主成分为对硝基苯酚、硝基苯、维生素C中一种，浓度在15-25μg/mL范围内）。

四、实训步骤

1．准备工作

(1)清洗容量瓶等需要使用的玻璃仪器，晾干待用。

(2)检查仪器，开机预热20min，并调试至正常工作状态。

2．绘制吸收光谱曲线

分别移取1.00mL的标准品贮备液至100mL容量瓶中，稀释至刻线。在210-340nm处绘制各标准溶液相应的吸收曲线。用试样溶液在210-340nm处绘制试样的吸收曲线。

3．试样成分定性

根据绘制的标准品与试样的紫外吸收曲线，判断试样的成分。

4．绘制工作曲线

以无水乙醇为溶剂，根据定性结果选择合适的标准品标准溶液，根据试样的吸光度大小，配制一系列标准溶液，并以无水乙醇为参比，做出工作曲线。

5．试样的测定

配制合适的试样浓度，测定试样溶液的吸光度并记录数据，平行测定两次。

6．结束工作

(1）实验完毕，关闭电源。取出吸收池，清洗晾干后人盒保存。

(2)清理工作台，罩上仪器防尘罩，填写仪器使用记录。

7．数据处理

(1)绘制标准品的吸收曲线。

(2）绘制试样溶液的吸收曲线。

(3)根据标准品与试样溶液的吸收曲线判断试样的成分。

(4)绘制工作曲线，计算相关系数，根据工作曲线计算试样含量。

五、注意事项

(1)标准品工作曲线相关系数要求在0.999以上。

(2)试液取样量应经实验来调整，以使其吸光度在适宜的范围内为宜。