一、实训目标

1．掌握双波长分光光度法消除干扰的原理和波长选择原则；

2．掌握紫外一标准对照法测定药物含量及计算方法；

3．熟悉紫外分光光度仪的构造和使用操作。

二、实训原理

复方磺胺嘧啶片系由磺胺嘧啶和甲氧苄啶组成的复方制剂。两者在紫外区有较强的吸收。

在稀盐酸溶液中，磺胺嘧啶在308nm处有吸收，而甲氧节吮在此波长处无吸收，故可在此波长处直接测定磺胺嚓咤的吸光度而求得含量。甲氧苄啶在277.4nm波长处有较大吸收，而磺胺嘧啶在277.4nm处与308nm处有等吸收点。故可采用双波长法以277.4nm为测定波长，308nm为参比波长，测定甲氧苄啶在该两波长处的ΔA(ΔA-A277nm-A308nm）值来计算含量。

复方磺胺嘧啶片（CompoundSulfadiazineTablets）每片中含磺胺嘧啶(C10H10N4O2S）应为0.360-0.440g；含甲氧苄啶(C14H18N4O3）应为45.0-55.0mg。

处方

磺胺嘧啶 400g

甲氧苄啶 50g

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制成 1000片

三、实训仪器与试剂

1．仪器

751紫外分光光度仪；容量瓶（100mL)；石英比色皿；移液管。

2．试剂

磺胺嘧啶对照品；甲氧苄啶对照品；复方磺胺嘧啶片；0.4%氢氧化钠溶液；稀盐酸溶液（0.0lmol/L)；冰醋酸。

四、实训步骤

1．磺胺嘧啶测定

取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于磺胺嘧啶0.2g）置于100mL量瓶中，加0.40o氢氧化钠溶液适量，振摇使磺胺嘧啶溶解，并稀释至刻度，摇匀，过滤。

精密量取续滤液2mL，置于另一100mL容量瓶中，加稀盐酸溶液，稀释至刻度，摇匀，在308nm的波长处测定吸光度。

另取105℃干燥至恒重的磺胺嘧啶对照品适量，精密称定，加稀盐酸溶液，溶解并定量稀释制成每1mL中约含40μg的对照品溶液，同法测定。

c供试＝A供试/A对照×c对照

c供试——供试品溶液的浓度；

c对照——对照溶液的浓度；

A供试——供试品溶液的吸光度；

A对照——对照溶液的吸光度。

2．甲氧苄啶测定

精密称取上述研细的细粉适量（约相当于甲氧苄啶40mg)，置于100mL容量瓶中，加冰醋酸30mL振摇使甲氧苄啶溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

另精密称取甲氧苄啶对照品40mg与磺胺嘧啶对照品约0.3g，分置100mL容量瓶中，各加冰醋酸30mL溶解，加水稀释至刻度，摇匀。前者作为对照品溶液（1)，后者过滤，取续滤液作为对照品溶液（2)。

精密量取供试品溶液与对照品溶液（1)、(2)各5mL，分置100mL容量瓶中，各加稀盐酸溶液，稀释至刻度，摇匀。取对照品溶液（(2）的稀释液，以308.0nm为参比波长λl,在277.4nm波长附近（每间隔0.2nm）选择等吸收点波长为测定波长（λ2)，要求△A=Aλ2-Aλ1=0。再在λ2和λl波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（1)的稀释液的吸光度，求出各自的吸光度差值（△A）。

c供试=△A供试/ΔA对照×c对照

m=c对照×△A供试/ΔA对照×100×W/称取×1000

式中c供试——供试品溶液的浓度；

c对照——对照溶液的浓度；

ΔA供试——供试品溶液在λ2、λ1测得吸光度差值；

ΔA对照——对照溶液在λ2、λ1测得吸光度差值；

W——平均片质量；

W称取——称取质量。

五、注意事项

(1)石英比色皿的正确使用和吸光度校正。

(2）吸光度读数3次，取平均值计算含量。

(3)读数后及时关闭光闸以保护光电管。