免疫组织的化学技术

免疫组织化学（immunohistochemistry）技术的基本原理是抗原一抗体反应。利用特异性的抗体与待测抗原反应，而后用化学方法将某种标记物（如荧光素或辣根过氧化物酶等）连接到抗体上，从而可以用肉眼观察靶抗原和抗体的特异性反应（图20.1)。目前所使用的免疫染色方法，大多将抗体的信号放大以提高灵敏度。

目前常用的有ABC法、SAP法、SP法等，这些方法的工作原理大同小异。首先按一定的比例将亲和素与酶标的生物素结合在一起，形成亲和素-生物素-过氧化物酶复合物，即ABC复合物。第一抗体不被标记，以生物素标记第二抗体，标记的抗体与复合物结合。染色步骤依次为第一抗体、生物素标记的第二抗体、ABC复合物，最后进行酶显色反应。由于亲和素对生物素有极强的特异性结合力，且有多价性，产生多级放大，从而提高了生物反应的敏感性和特异性。

免疫荧光技术基本相同，只是用荧光素作为显色系统 ;免疫双重或多重标记法是应用不同颜色的荧光素或酶，来标记不同的抗原。免疫双标可用不同动物来源的抗体，选用不同的显示系统在同一张组织片上同时或前后标记两种或两种以上的抗原成分。理想的双重标记是两种抗体和标记系统之间不会发生交叉反应。