(1) 为何要自制上样缓冲液，而不能使用PCR中的10×上样缓冲液？

在凝胶阻滞实验的整个过程中，必须注意不能使蛋白质变性，一旦发生蛋白质变性，则会影响其与探针结合，导致实验失败。因此，从核蛋白提取，标记探针与蛋白质结合，到电泳整个过程中都要防止蛋白变性。PCR中的10×上样缓冲液含有SDS蛋白变性剂，所以不能使用。在自制的上样缓冲液中切忌加入蛋白变性剂。

(2）放射自显影后，为何条带模糊？

不同实验的信号强度不同，如信号较弱，放射自显影时间需要较长，蛋白质一探针复合物区带就会扩散，导致条带模糊。如果电泳结束后，首先干胶，再进行放射自显影，则条带就不会扩散了。