6.3 硫酸庆大霉素标准品

已知纯度标准品，密封避光，防潮，4℃保存。

6.4 磷酸盐缓冲液(pH8.0±0.1)

称取13.3 g磷酸二氢钾及6.2 g氢氧化钾，溶解于1 000 mL水中，于121℃灭菌15 min。

6.5 庆大霉素标准储备液

准确称取适量的硫酸庆大霉素标准品，用磷酸盐缓冲液配制成浓度为1000 ug/mL的标准储备液。保存于4℃冰箱中，可使用1个月。

6.6 庆大霉素标准工作液

取一定量庆大霉素标准储备液，用磷酸盐缓冲液稀释成浓度为0.05 ug/mL的庆大霉素标准工作液，应当日配制。

6.7 生理盐水

称取8.5g氯化钠，溶解于1 000 mL水中，分装后，于121℃灭菌15 min。

7 检测方法

7.1 样液制备

称取10g试样，置于均质杯中，加入10 mL磷酸盐缓冲液，8000r/min均质3 min后，室温放置60min，移入离心管中4000r/min离心15 min，取上清液于作为待测样液。

7.2 菌悬液制备

将试验菌种接种于装有培养基工的试管中，于36℃±1℃培养24 h±1h。移1 mL菌液于盛有适量培养基Ⅱ的克氏瓶中，使菌液均匀覆盖在琼脂表面，于36℃±1℃培养24 h+1 h。然后用适量生理盐水将菌苔洗下，备用。置4℃冰箱中(不宜超过1周)。

7.3 检定平板的制备

在测定前，需进行预测试，以求得菌悬液最佳用量。用0.05 ug/mL庆大霉素标准工作液对加有不同量的菌悬液的平板进行测试，经培养后能使得0.05 ug/mL标准工作液在平板上产生直径在10 mm以上的清晰、完整的抑菌圈的菌悬液用量为最佳用量。

将培养基Ⅲ融化，冷却至50℃左右，加入最佳用量的菌悬液，使其充分混匀后，取10 mL，注入灭菌培养皿中，保持水平，凝固后即为检定平板。制备好的平板置2℃～8℃冰箱可保存2 d～3 d。

7.4 样液的测定

取制备好的检定用平板两个，在平板底部作好标记，把牛津杯适当间隔置于平板上，每个平板最多不超过6个，在其中一个牛津杯中加入280 uL 0.05 ug/mL庆大霉素标准工作液作为阳性对照，其余牛津杯中加入280uL之样液，冷藏放置30 min后，36℃±1℃培养8h后开始观察，如果0.05 ug/mL庆大霉素标准工作液产生清晰、完整的抑菌圈时终止培养，如果无明显抑菌圈，继续观察至24 h。用游标卡尺测量标准工作液和样液的抑菌圈直径大小。每份样品做两个平板上的平行试验。

8 结果判断和报告

如样液在平板上无抑菌圈，0.05 ug/mL 庆大霉素标准工作液的抑菌圈直径大于10 mm，即报告“阴险”。

如样液在平板上呈现抑菌圈，抑菌圈直径在10 mm以上，即报告“初筛阳性”。

如样液在平板上呈现抑菌圈，抑菌圈直径小于10 mm，大于8 cm，或者两个平行结果不一致时，视为可疑，应重新测试后判定。

阳性样品需要用确证方法进行定性及定量分析。

9 检测限

本方法的检测限为0.05 mg/kg。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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