3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

取经绞碎混匀的试样20g(精确到0.1g)于瓷研钵中，加40g无水硫酸钠，研磨脱水，转移至250 mL锥形瓶中。准确加入三氯乙酸溶液60 mL，于振荡器上提取30 min。移取上层试液于50 mL离心管中，以3000r/min离心5 min。

准确吸取上清液15 mL，加入氢氧化钠溶液(10％)数滴使之成为碱性，移入层析柱(3.3.14)中。用水洗涤柱子，弃去流出液。用氯化钾盐酸溶液25mL洗脱柱中氨丙嘧吡啶，使其自然流出，收集洗脱液于50 mL带刻度离心管中。

于洗脱液中加入4 mL氢氧化钠溶液(30％)，混匀。再加入硝酸银溶液0.4 mL,摇匀，静置2 min。加入铁氰化钾溶液2 mL，摇匀。加入异丁醇12 mL，振摇1 min，以3000r/min离心15 min。

取上层异丁醇溶液9mL于蒸发皿中，在60～70℃水浴上蒸发近干，并自然挥发干。用0.3 mL异丁醇溶解残渣并转移至样品瓶中，供测定用。

3.4.2 测定

3.4.2.1 薄层扫描条件

a．光源：氙灯；

b．激发波长352nm，发射波长420 nm;

c．激发狭缝10 mm，发射狭缝10 mm;

d．光电压750V;

e．扫描速度60 mm/min，纸速5 cm/min。

3.4.2.2 标准曲线的绘制

取0.2 ug/mL氨丙嘧吡啶标准工作溶液10 mL，按3.4.1从“加入4 mL氢氧化钠溶液(30%)……”开始，至“……供测定用”操作进行。分别在薄层板上滴加1、2、3、4、5 uL标准工作溶液，相当于标准量为5、10、15、20、25 ng，经薄层展开后测定。以氨丙嘧吡啶的含量(ng)对相应的峰面积(或峰高)绘制标准曲线。

3.4.2.3 薄层色谱测定

将高效薄层板在105～110℃活化2h后，置干燥器内备用。如超过一周使用时，需重新活化。

取适宜体积的标准工作溶液和样品溶液在薄层板上距下端1.5～2 cm基线上，参插点样，每点间隔1 cm。

将薄层板放入用吡啶-异丁醇-水(66+17+17)预饱和的层析缸中展开10～15 min，至前沿达约10 cm，取出吹干。

在紫外灯365 nm下观察薄层板结果，氨丙嘧吡啶呈蓝紫色荧光点。根据标准点的R_f值确定样品中氨丙嘧吡啶位置，标出标记，按薄层扫描条件进行测定。

3.4.3 空白试验：除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

3.5 结果计算和表述

按薄层扫描测定所得样液中氨丙嘧吡啶的峰面积(或峰高)，从标准曲线上查出相应的氨丙嘧吡啶的量(ng)并按下式计算试样中氨丙嘧吡啶含量：

式中：X—试样中氨丙嘧毗睫含量，mg/kg ;

c—在标准曲线上查出相应氨丙嘧吡啶的量9ng;

V₁—样液最后定容体积，uL:

V₂—样液滴加在薄板上的体积，uL;

m—最终样液所相当的试样量，mg。

注：空白值应从计算结果中扣除。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.02 mg/kg。

4.2 回收率

回收率的实验数据：氨丙嘧吡啶添加浓度在0.02～0.10mg/kg范围内，回收率为78.0％～91.6％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。