10 范围

本部分规定了牛和猪肌肉中安乃近代谢物4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoantipyrine), 4-乙酰氨基安替比林(4-acetylaminoantipyrine) , 4-甲基氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine)和4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine)的液相色谱-串联质谱测定方法。

本部分适用于牛和猪肌肉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-氨基安替比林残留量的测定。

本部分的方法检出限：4-甲酰氨基安替比林为1.8 ug/kg；4-氨基幸替比林和4-甲基氨基安替比林为1.5 ug/kg；4-乙酰氨基安替比林为1.0 ug/kg。

11 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部年总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)；

GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

12 原理

肌肉中安乃近代谢物残留用硫酸钠溶液(pH=7)提取，过滤后，经Bond Elut C₁₈固相萃取柱或相当者净化后，用甲醇洗脱，氮气吹干。残渣用甲醇＋水溶解，供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法或外标法定量。

13 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

13.1 甲醇：色谱纯。

13.2 乙腈：色谱纯。

13.3 硫酸钠。

13.4 亚硫酸钠。

13.5醋酸铵，色谱纯。

13.6 硫酸钠＋亚硫酸钠提取溶液：准确称取14.20 g无水硫酸钠和2.52 g亚硫酸钠，用水溶解，并使其体积达到约950 mL，然后用0.5 mol/L的稀硫酸调节溶液的pH值至7.0，用水定容至1 000 mL。

13.7 淋洗液：甲醇+水(1+19)。

13.8 样品定容液：甲醇＋水(1+9)。

13.9 4-甲基氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-酰氨基安替比林和4-氨基安替比林标准物质：纯度≥99％。

13.10 内标标准物质：4-异丙基氨基安替比林，纯度≥99%。

13.11 标准储番溶液：100mg/L。准确称取适量的各种安乃近代谢物标准物质(13.9)，用甲醇(13.1)配制成浓度为100 mg/L的标准储备溶液，避光-18℃保存，可使用3个月。

13.12 混合标准储备溶液：1.0 mg/L。吸取每种适量标准储备溶液(13.11)，用甲醇稀释成1.0 mg/L的混合标准工作溶液，避光-18℃保存，可使用1个月。

13.13 内标储备溶液：准确称取适量的内标标准物质(13.10)用甲醇(13.1)配制成浓度为100 mg/L标准储备溶液，避光-18℃保存，可使用3个月。

13.14 内标工作溶液：0.20 mg/L。吸取适量的内标储备溶液(13.13)，用甲醇稀释成0.20 mg/mL的内标标准工作溶液，避光-18℃保存，可使用1个月。

13.15 基质混合标准工作溶液：吸取适量的混合标准储备溶液(13.12)和适量内标工作溶液(13.14),用空白样品提取液配成浓度为1.0 ug/L、5.0 ug/L、10.0 ug/L、20.0ug/L、40.0ug/L和内标浓度为0.20 mg/L的基质混合标准工作溶液。当天配制。

13.16 Bond Elut C₁₈固相萃取柱或相当者：500 mg, 3 mL。用前分别用5mL甲醇和5mL水处理，保持柱体湿润。

13.17 滤膜：0.45 um。

13.18 玻璃滤纸。

14 仪器和设备

14.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)

14.2 固相萃取装置。

14.3 氮气浓缩仪。

14.4 旋涡混匀器。

14.5 分析天平：感量0.1 mg和0.01g。

14.6 真空泵。

14.7 均质器。

14.8 移液器：10 uL～100uL和100uL～1000 uL。

14.9 聚丙烯离心管：50 mL，具塞。

14.10 pH计：测量精度±0.02

14.11 低温离心机：可制冷到4℃。

14.12 玻璃离心管：15 mL。

15 试样的制备与保存

15.1 试样的制备

取有代表性的牛或猪肌肉组织，制成实验室样品。试样分为两份，置于样品瓶中，密封，并做上标记。

15.2 试样保存

制备好的试样置于-18℃冰柜中避光保存。

相关链接：液相色谱-紫外检测法测定牛和猪肌肉中安乃近代谢物残留量（二）

文章来源：《化学试剂标准汇编》

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