北京普天同创生物科技有限公司
16 测定步骤
16.1 提取
称取5g试样,精确至0.01g。将上述样品置于50 mL聚丙烯离心管(14.9)中,加入0.25 mL浓度为2.0 mg/L的内标工作溶液(13.14),然后加入15 mL硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液(13.6),均质1 min,在10℃以4000r/min离心5 min。将上清液转移到另一个干净的50 mL容量瓶中,残渣再分别加入15 mL、10 mL硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液提取两次,离心后,合并上清液,并用硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液定容至50 mL,混合均匀,然后用玻璃滤纸过滤,待净化。
16.2 净化
取25 mL提取液(16. 1)放入C18固相萃取柱(13.16)中,以约1 mL/min的流速使样液通过固相萃取柱,待样液全部通过后,依次用5 mL水和5 mL甲醇+水淋洗液(13.7)淋洗固相萃取柱,弃去全部流出液,减压抽干固相萃取柱10min。最后用5 mL甲醇洗脱,洗脱液收集于15 mL玻璃离心管中,置于氮气浓缩仪(14.3)上在55℃吹至近干,用样品定容液(13.8)定容至1.0 mL。定容液混匀后,过0.45um滤膜,供液相色谱-串联质谱测定。
同时取阴性样品,按16.1和16.2步骤制备空白样品提取液,用于配制基质混合标准工作溶液。
16.3 平行试验
按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定。
16.4 回收率试验
吸取适量混合标准储备溶液和内标标准工作溶液,添加到阴性样品中,按上述操作步骤,测定后计算样品添加的回收率。
16.5 测定
16.5.1 液相色谱条件
a)色谱柱:Atlantis dC18色谱柱,3um,150 mm×2.1 mm或相当者;
b)柱温:30℃;
c)进样量:20uL;
d)流动相、流速及梯度洗脱条件见表3。
表3 流动相、流速及梯度洗脱条件
16.5.2 质谱条件
a)离子源:电喷雾离子源;
b)扫描方式:正离子扫描;
c)检测方式:多反应监测(MRM);
d)电喷雾电压:5000V;
e)辅助气流速:7.0L/min;
f)辅助气温度:450℃;
g)聚焦电压:200V;
h)碰撞室出口电压:15V;
i)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见表4。
表4 安乃近代谢物测定的质谱参数
文章来源:《化学试剂标准汇编》
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