11．为什么要求选择检测器噪声小的HPLC?

答；该问题已经可以从问题“10”得到解答，请读者参见问题“10”，此不赘述。

12．为什么要求选择检测器线性动态范围宽的HPLC？使用者如何了解HPLC的线性区大小？

答：从仪器学角度看，如果HPLC仪器的线性动态范围窄，则很难保证使用时仪器工作在线性区，就很难得到准确可靠的分析测试数据，所以使用者总是希望使用线性动态范围宽的HPLC。使用者要了解HPLC线性动态范围，唯一的办法就是通过测试。使用者可以自己配制以数量级递增的不同浓度的标准样品(浓度为c₀，c₁，c₂，c₃，…，c_n)，依次测试这些样品的吸光度值(A₀，A₁，A₂，A₃，…，A_n)；找到在低端开始弯曲的拐点(向上)c₁或A₁和高端开始弯曲的拐点(向下)c_n或A_n，而后，求出c_n/c₁，或A_n/A₁(c_n/c₁=A_n/A_l)；该数据就是线性动态范围。使用者只需要在该范围内使用仪器，就能保证在线性区，就能避免由于没有使用在线性区而产生的误差。

13．为什么要求选择波长可调的HPLC紫外分光检测器？

答：从仪器学理论角度讲，紫外检测器是根据比尔定律设计制造的，研究的是物质对单色光的吸收。即物质对单色光的吸光度A的大小与物质的浓度。成正比。而单色光中不同的波长对同一物质有不同的摩尔吸光系数(ε)，不同的ε，有不同的灵敏度。如果选择固定波长的HPLC紫外检测器，就不能保证物质对光有最佳吸收值，即不能保证分析灵敏度(分析数据的最佳值)。所以，使用者应该选择波长可调的紫外分光检测器为好。

14．为什么要求选择检测器杂散光小的HPLC?

答：因为杂散光是指不应该有光的地方出现的光，它是紫外吸收检测器在高浓度下产生误差的主要来源之一，即如果紫外检测器的杂散光太大，就会产生比尔定律偏离，即A≠εbc(ε为摩尔吸光系数，b为光程，c为样品的浓度)；一般来讲，杂散光产生的比尔定律偏离(分析误差)，是分析测试数据偏小。所以，使用者应该选择杂散光小的HPLC紫外吸收检测器。

15．如何延长HPLC紫外检测器氘灯的寿命？

答：HPLC紫外检测器的氘灯是一种易损件，过去国产氘灯一般寿命在500～600小时(如上海电光器件厂生产的DD2.5氘灯)，现在国产氘灯可以达到1000小时以上(如常州玉宇电光公司生产的氘灯)，有些可达近2000小时；国外生产的氘灯，很多都自称能达到2000小时左右(如日本滨松的氘灯，但是实际上也不一定都能达到2000小时；因为一是氘灯本身的质量不一定真有那么好；二是氘灯的使用寿命与电源有密切关系)。我们可以采用以下方法来延长氘灯的使用寿命：①采用使用在半功率点的办法可以明显延长氘灯的使用寿命，作者曾经对上海电光器件厂生产的DD2.5氘灯，采用使用在半功率点附近的办法(即工作电流的额定值为300mA的国产DD2.5的氘灯，工作电流降为180mA左右，结果出厂指标为500小时的氘灯，竟然使用了3500小时以上)；②采用逐步提高氘灯的触发电压(点亮氘灯的电压)办法，也可以延长氘灯的使用寿命。作者设计了一种触发电压连续可调的氘灯电源，可以点亮对那些寿命已经到期、在进口或国产仪器上已经无法点亮的氘灯(国产氘灯和进口氘灯)，并且能正常工作。

16．为什么要求选择检测器检测限小的HPLC?

答：首先，应该从仪器学理论角度来分析，影响测试样品数据可靠性的主要因素有哪些？特别是样品浓度较稀时，测试数据的误差往往偏大，这是为什么？这是因为仪器的噪声大，该噪声会直接成为分析检测数据的一部分，分析测试的误差就会增大。而噪声直接影响HPLC的检测限，噪声大，检测限就高，HPLC的灵敏度就低。特别是样品很稀时，需要认真考虑检测限。如果是要求较高的分析工作，特别在科研工作中，往往样品浓度较稀，这时一定要求HPLC的检测限低(优秀)，才能满足分析检测要求。所以要求选择HPLC检测器具有小的检测限。

17．为什么HPLC的高压泵漏液时压力就下降？

答：这个问题应该从高压泵和色谱柱的工作原理来讲。HPLC的高压泵一般是一种恒流泵，它是在其后面接入色谱柱(采用高压方法安装的色谱柱)后，由于色谱柱产生了阻力，所以高压泵就显示出高压值。只有高压泵和色谱柱是处在一个密封的状态下，并且流速恒定时，高压泵才能显示压力不变。如果高压泵不漏液，则色谱柱里的溶剂流速会恒定，高压泵显示的压力会恒定。如果高压泵漏液，则等于从高压泵流出的溶剂除了一部分进入色谱柱外，还有一部分漏掉了，此时高压泵所受到的阻力就小了，所以高压泵显示的压力就下降了。

18. HPLC检测器的光谱带宽是固定的好还是可变的好？

答：仪器学理论告诉我们，HPLC紫外检测器的光谱带宽是影响分析误差的因素之一，每一种样品都有自己对应的光谱带宽，这个对应的光谱带宽叫作最佳光谱带宽。只有在最佳光谱带宽情况下分析测试，才能得到最佳的分析测试结果(分析测试的数据误差最小)。如果检测器是固定光谱带宽，则除这个固定光谱带宽值所对应的部分样品可得到最佳光谱带宽外，对其他样品就不是最佳光谱带宽，此时的分析测试数据就不是最佳值(即含有光谱带宽带来的分析误差)；如果HPLC检测器的光谱带宽可调，则较容易寻找最佳光谱带宽，能减少分析误差。所以，HPLC检测器的光谱带宽应该是可变(分挡可调或连续可调)者为好。

19. HPLC的色谱柱使用后为什么一定要清洗？怎样清洗？

答：HPLC的色谱柱是由不锈钢管、接头、管道等机械零件和色谱柱填料(固定相)等组成。每次使用后，必须认真清洗，否则流动相和样品残留部分会一直在色谱柱中与色谱柱的固定相发生化学反应。由于长时期连续发生键合作用，最后会使色谱柱损坏，所以色谱柱使用后一定要认真清洗。HPLC色谱柱的清洗方法(包括清洗溶剂、清洗时间等)很重要，一般应该注意以下几个方面：①当天使用过的色谱柱，下班时一定要用清洗液(最好用甲醇：水＝70 :30)清洗30分钟(或用20倍色谱柱的床体积清洗)后，再用甲醇清洗10分钟后关机；②如果当天使用后，估计在较长时期不会再用的色谱柱，除用上述甲醇与水(70：30)的洗液清洗外，还应该用乙腈清洗10分钟，而后浸泡在乙腈中(也可以漫泡在甲醇中)。

20. HPLC的光学类检测器的双光路好还是单光路好？为什么？

答：从仪器学理论的角度来讲，HPLC的光学类检测器(紫外检测器、荧光检测器等)有双光路、单光路之分。双光路紫外检测器指的是有两束光、两个流动池的检测器。一般来讲，紫外检测器和荧光检测器中真正的双光路仪器比较少见，至今除作者研发的UV/FL一机两用的紫外荧光检测器外，还没有见到过真正的双光路紫外检测器和荧光检测器。而有两路光、只有一个流动池的检测器不能叫作双光路检测器，只能叫准双光路检测器。但是，准双光路的紫外检测器并不少见，例如国产的L600等HPLC的紫外检测器就是准双光路的仪器(但是有人也称之为双光路检测器，这是不确切的)。从仪器学理论和HPLC使用中的分析误差要求来讲，双光路检测器可以适当消除光源波动的影响、消除杂散光的影响，还可以抵消一部分电子学噪声的影响，可以提高分析测试数据的可靠性，但是结构复杂、成本高。而准双光路检测器，则只能适当消除光源波动的影响、抵消很少的一部分电子学的噪声，不能消除杂散光的影响。所以，从HPLC的分析检测数据的误差来讲，光学类的HPLC检测器应该是双光路的为好。

相关链接：HPLC仪器实践中具有实际使用价值的100个问题（一）