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布鲁菌属分类和微生物学检查

发布时间:2017-09-03 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:2321

一、分类

布鲁菌属(Brucella)为人兽共患传染病的病原菌,最早由英国医师David Bruce首先分离出来而得名。本属只有一个种,但包括6个生物变种,如羊布鲁菌(B.melitensis)、牛布鲁菌(B.abortus)、猪布鲁菌(B.suis)、绵羊布鲁菌(B.ovis)、犬布鲁菌(B.canis)和沙林鼠布鲁菌(B.neotomae),以及19个生物型。我国流行的主要是羊布鲁菌、牛布鲁菌和猪布鲁菌,尤以羊布鲁菌最常见且致病性最强。布鲁菌属细菌DNA的G+C的摩尔分数为56%~58%。

二、生物学特性

布鲁菌属细菌是一类革兰阴性短小杆菌,两端钝圆,菌体大小为(0.5~0.75) um×(0.6~1.5)um。无鞭毛,无芽胞,光滑型菌株有微荚膜。

本菌为需氧菌,但在初次分离培养时需5%~10%CO2,营养要求较高,培养基中应加硫胺素、烟酸和生物素等以促进其生长,实验室常用肝浸液培养基或改良的厚氏培养基。最适生长温度为35~37℃,最适pH6.7。本菌生长缓慢,强毒株比弱毒株生长慢,初次分离则更加迟缓。在血琼脂平板上培养2~3天,出现微小如针尖状、无色、透明、光滑型、不溶血菌落,经人工传代后可逐渐转变为粗糙型菌落。

多数布鲁菌能分解尿素和产生H2S,根据产生H2S的多少以及在含复红、硫堇碱性染料培养基中的生长情况,可鉴别三种布鲁菌。

布鲁菌有A,M和G三种抗原成分,G为共同抗原,牛布鲁菌以A抗原为主,A:M为20:1;羊布鲁菌以M为主,M:A为20:1;猪布鲁菌A.M为2:1。用A与M因子血清进行凝集试验可以鉴别。

三、临床意义

布鲁菌感染家畜能引起母畜流产,病畜还可表现为睾丸炎、附睾炎、乳腺炎、子宫炎等。病畜的分泌物、排泄物、流产物及乳类等含有大量病菌,这些细菌能生存4个月左右,经皮肤、黏膜、眼结膜、消化道、呼吸道等不同途径感染人体。布鲁菌侵入机体后即被吞噬细胞吞噬,布鲁菌为胞内寄生菌,可沿淋巴管到达局部淋巴结,生长繁殖达一定数量后侵入血流引起菌血症。由于内毒素的作用,导致患者发热,随后细菌进入肝、脾、骨髓、淋巴结等网状内皮系统,血液中的布鲁菌逐渐消失,体温也逐渐正常。细菌繁殖到一定数量时再次进入血液,又出现菌血症并致体温升高。如此反复形成菌血症,使患者的热型呈波浪式,故称为波浪热。受损组织不仅为肝、脾、骨髓、淋巴结,而且还可累及骨、关节。血管、神经、内分泌及生殖系统,患者伴有多汗、游走性关节痛、神经痛、肝脾及淋巴结肿大、男性睾丸炎、女性流产等。该病易转为慢性,且反复发作。

患病与职业有密切关系,兽医、畜牧者、屠宰工人、皮毛加工者等患病率明显高于一般人群。我国多见于内蒙、东北、西北等牧区。

四、微生物学检查

1.检验程序布鲁菌的检验程序见图18-3。

2.标本采集急性期取血,慢性期取骨髓、尿液,或流产胎儿的淋巴、肝、脾、肺组织。

3.直接镜检因标本中细菌数量较少,所以,标本直接涂片、革兰染色检查布鲁菌意义不是很大。

4.分离培养将标本接种于血琼脂平板或双相肝浸液培养基,置于35℃,5%~10%CO2环境中培养,多在4~7天形成菌落,若培养30天仍无菌生长可报告为阴性。

图18-3布鲁菌的检验程序

5.鉴定首先根据菌体形态、染色、菌落、特殊营养需求、生长缓慢、触酶试验等进行初步鉴定,然后依据对CO2的需求、H2S产生、染料耐受性等生化反应鉴定到种。临床常见布鲁菌鉴定特征见表18-4。

表18-4临床常见布鲁菌鉴定特征

注:D表示不定;(-)表示大部分菌株阴性。

6.抗原检测目前已有多种ELISA试剂盒应用于实验室,多采用固相夹心法或间接法检测标本中的相应抗原。

7.血清学诊断感染1周后患者血清中出现IgM抗体,可用凝集试验检测,以牛布鲁菌作为抗原(浓度为1×109CFU/mL) ,凝集效价达到1:200时有诊断意义。感染2~3周后患者血清中出现IgG抗体,可用补体结合试验检测,效价达到1:10时为阳性,或双份血清抗体效价升高不少于4倍时有诊断意义。IgG抗体保持时间长,在整个感染活动期持续存在,对诊断慢性布鲁菌病临床意义较大。ELISA法敏感性高于凝集试验,而且可检测IgM型及IgG型抗体,但关于布鲁菌的ELISA检验目前还没有商品化和标准化。

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