将葡萄糖氧化生成C0₂是葡萄糖代谢的主要方式之一。本实验主要介绍通过测定脂肪组织或脂肪细胞氧化葡萄糖后生成的C0₂的量，了解脂肪组织或细胞对葡萄糖的转化能力。本实验可用于评价胰岛素或不同的抗糖尿病药物对葡萄糖转化的调节作用，及胰岛素抵抗或不同的糖尿病状态下葡萄糖转化的能力。

【材料】

1．动物160～200g雄性SD大鼠。

2．试剂

(1）温孵液：NaCl 6.19g, NaHC0₃ 3.36g, CaC1₂ 0.11g, KC1 0.37g, MgC1₂ 0.l0g，溶至1000m1蒸馏水中，pH调至7.4；取上述液体100m1加明胶20mg, D-葡萄糖316mg，通气体95% 02:5% C0₂；

（2) 5mo1/L H₂SO₄；

（3）1.8mol/L NaOH；

(4) U-14C-葡萄糖用蒸馏水配制成浓度为148kBq/ml;

(5）闪烁液［2,5-二苯基噁唑(2,5-Diphenyl oxazolo, PPO）-1,4-双（5-苯基-噁唑基）苯(1,4-Bis-[5-phenyl-oxazoyl-2]-benzene, POPOP）甲苯] PPO 5.Og, POPOP 0.5g溶于800m1甲苯和200m1 Triton-X-100的混合溶液内。

3．其他材料 25ml烧瓶，带中心玻璃小瓶的橡皮塞。

【方法】

1．制备脂肪组织 雄性SD大鼠，禁食12小时后断头或颈椎脱臼法处死。取附睾脂肪组织远端部分100～200mg，称重后剪碎。称同重量组织块置于对照瓶中。

2．按表11-3所示依次加入试剂及脂肪组织样品。

3．室温下放置过夜，第二天用液闪仪计数测定放射活性。

【结果与分析】

1．计算出脂肪组织转化葡萄糖的能力

（测定管计数值-对照管计数值）cpm/组织重量（g) /2h

2．计算出脂肪细胞转化葡萄糖的能力由测定管计数值减去对照管计数值和已知的U-¹⁴C-葡萄糖的比活性计算氧化为¹⁴C0₂的U-¹⁴C-葡萄糖的量（umol)，脂肪细胞转化葡萄糖的能力以下式表示：

U-¹⁴C-葡萄糖氧化为¹⁴C0₂的量（umol)/2x10⁵细胞／2h

【注意事项】

如测量脂肪细胞对葡萄糖的转化能力，测定方法同脂肪组织，只是将组织样品改为脂肪细胞样品（4x10⁴细胞／ml) 1.9m1。脂肪细胞的制备见“一、葡萄糖转运实验”，或者采用3T3-Ll前脂肪细胞系，注意进行该实验前将其诱导分化为成熟的脂肪细胞。