（一）肿瘤细胞株的共同特征

肿瘤细胞在体外培养6个月以上，生长稳定，保持细胞特征，并能连续传代的，可称为细胞株或系，肿瘤细胞系的共同性鉴定包括：

1．细胞的来源

(1)采取组织标本时，要记录患者的姓名、年龄、性别、病历号、临床诊断（包括分期）和病理诊断，并记录培养日期和培养方法。

(2）在手术或活检组织旁切下小块组织作切片进行病理诊断。要按照组织学类型诊断，如肺癌组织学类型分为鳞状细胞癌变型（梭形细胞癌），小细胞癌（燕麦细胞癌、中间细胞型、混合燕麦细胞癌）、腺癌（小腺体腺癌、乳头状腺癌、细支气管肺泡癌，实性癌有黏液形成）、大细胞癌变型（巨细胞癌、透明细胞癌）。

2．形态观察

(1)在光镜下观察活细胞与染色细胞的肿瘤细胞特征，如细胞大小不等，细胞铺满瓶底后显示重叠现象，核和胞质比例与正常细胞不同，肿瘤细胞的核大、胞质少，核内不匀质，染色质增多，核仁增大或增多等。如为上皮癌，在相差显微镜下可见到细胞间桥；如为腺癌，镜下可见到分泌颗粒。

(2）透射电镜观察肿瘤细胞的超微结构，可发现细胞外形不规则，有较多的胞质突起或微绒毛，胞核形状不规则，核膜凹陷明显，核内染色质分布不均，有的凝成团块，核仁大，胞质内核糖体变为聚核糖体。如为腺癌，可见胞质内电子密度高的分泌颗粒；如为上皮癌，可见胞质张力原纤维和细胞间的连接（如桥粒和半桥粒）等。

3．生长情况肿瘤细胞的生长情况包括分裂指数、生长曲线、细胞群体倍增时间、集落形成率或贴壁率、半固体培养中的集落形成率。

4．细胞表面改变包括刀豆球蛋白或其他植物凝集素凝集试验，方法见前文所述。

5．染色体分析包括染色体众数与主干系形成、染色体分组、染色体分带和特殊标记染色体。在建株过程中（包括原代培养）和建株后最好于一定间隔时间检查染色体的稳定性。

6．异种移植将肿瘤接种于大鼠、小鼠、仓鼠等的皮下、脑、眼前房和颊囊等，为降低被接种动物的免疫力和提高接种成功率，新生动物需经X线全身照射、给予肾上腺皮质激素、摘除胸腺或给予抗淋巴细胞血清等。有条件的应尽量用裸小鼠移植，裸小鼠先天缺失胸腺，因而缺乏细胞免疫反应，对移植的异种组织无排斥反应。肿瘤细胞在裸小鼠体内长成肉眼觉察到的肿瘤，一般需10天至几个月的潜伏期。在裸小鼠体内移植肿瘤组织可显示原发肿瘤的特异细胞形态。

（二）人肿瘤细胞株的个别特性

1．产生激素 一些内分泌腺的肿瘤能产生激素，体外培养成株的细胞仍保留这些特性，如胎盘的绒毛细胞肿瘤产生胎盘促性腺激素（HCG)，绒毛膜癌分泌人绒毛膜促性腺激素、黄体酮和雌激素。用放射免疫法测定，乳腺癌细胞有雌二醇及黄体酮受体，垂体瘤分泌生长激素，人卵巢颗粒细胞瘤细胞株（HTOG)产生雌酮E1和17β-雌二醇E2。

2．异位激素 有的非内分泌器官的肿瘤也能产生激素，称为产生异位激素的肿瘤。这种肿瘤经体外培养成株后有的还保留产生异位激素的能力，如未分化肺燕麦细胞癌产生5-羟色胺和促肾上腺皮质激素（adreno cortico tropic hormone, ACTH)，人肺巨细胞癌细胞株PLA-801产生促性腺激素，甲状腺癌产生ACTH，肝癌产生绒毛膜促性腺激素如黄体生成素(luteinizing hormone, LH）等，这些都是功能性肿瘤的代表。

3．癌胚共同抗原

(1)胚胎性蛋白质：如甲胎蛋白（AFP)，用免疫荧光间接法或平板双向扩散法，可用以对肝癌进行诊断；

(2）癌胚抗原（CEA)：可用以对结肠癌、胰腺癌、食管癌进行诊断；

(3)癌胎儿同工酶：如绒毛膜癌细胞株T3M-3用酶抗体法和酶组织化学法，可显示胎盘性碱性磷酸酶。

4．组织特性癌细胞株也能保持其起源组织的特性，可利用这些特性对腺癌、鳞癌等进行鉴别。

(1)一般腺癌（胃癌、肺腺癌）细胞株的鉴定：用过碘酸希夫染色（PAS)和a液卡红染色或PAS和Alcianblue染色，可见胞质中有细滴状颗粒，电镜下有电子密度高的分泌颗粒。

(2）一般鳞状上皮癌细胞株的鉴定：鳞状上皮细胞癌包括舌癌、鼻咽癌和皮肤癌等，尚无高特异性鉴定方法的报道。除了以超微结构中的细胞连接、桥粒和胞质内的张力原纤维来证明上皮细胞特征外，可用抗人细胞角质蛋白来确定细胞株来自上皮而非来自基质。也有用组织化学反应和一些植物凝集素结合来区分培养细胞来自上皮或来自基质。

(3)用中间丝鉴定：人肿瘤细胞株的细胞来源中间丝（interfilaments, IFs）为蛋白质的多基因系统群，可有6个类型。肌纤维蛋白（desmin)和波形蛋白（vimentin）是肌肉中两种重要的中间丝。肿瘤按IFs类型可区分为：①癌：含细胞角蛋白（cytokeratin, CK) ;②交感神经瘤：如节细胞性神经母细胞瘤，含神经细丝；③肌源性肉瘤：含肌纤维蛋白丝（desminfilament) ;④神经胶质瘤：含胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acid protein,GFAP) ;⑤非肌源性肉瘤：含波形蛋白。但也有某些细胞类型无IFs。还可用单克隆抗体区分不同的细胞角蛋白多肽。

(4）其他：①黑素瘤：多巴反应阳性，电镜可见细胞内有黑色素颗粒，在培养过程中有减少倾向；②标志染色体：用G带C带等方法寻找标志染色体；③特殊蛋白质：如人脑恶性胶质瘤细胞株SHG-44细胞中存在S-100蛋白，GFA免疫酶标组织化学呈阳性；④标志酶：如OUR-10人肾癌细胞株的谷氨酞转肽酶以及细胞表面特异性抗原或特异受体等。

（三）细胞株污染的鉴定

1．病毒污染在细胞培养中有的病毒可明显损伤细胞，有的则对细胞无明显影响。必须了解培养细胞中存在的病毒是否原存于宿主细胞，还是实验操作过程中的污染或是由培养基生物制品（如牛血清）带来的污染。

2．支原体污染检查方法包括普通染色观察、培养、免疫荧光法、特异性酶比色法、电镜检查、放射自显影检查与DNA或RNA结合的荧光显微镜检查法。其中以最后一种方法比较快速。发现阳性后，再用扫描电镜复查核实。这是建立细胞株必需的检查。

3．细胞株交叉污染的检测

(1)细胞遗传学方法：常规染色体分析检查种间污染；染色体G带核型分析鉴别同种肿瘤细胞；染色体Q带核型分析检测人类Y染色体。

(2）免疫学方法：抗原抗体体外反应鉴定细胞的种特异性以及人类细胞HLA测定。

(3)生化遗传学方法：同工酶谱测定细胞株的种特性；多态性酶表型组合测定不同基因型人细胞。以上为在目前的认识水平上提出的建议，随着细胞生物学和肿瘤学的进一步发展以及新技术和新方法的不断出现，培养细胞的建株工作水平将不断提高。