一旦培养的肿瘤细胞生长成为形态单一的细胞群体后，不论是用于短期实验研究，还是用于建立细胞系，都需要进行一系列的细胞生物学鉴定，其目的在于：①证明培养细胞是否来自原来的肿瘤细胞；②说明肿瘤组织类型；③描述肿瘤细胞的生物学特性。

一、培养肿瘤细胞常用的生物学检查项目

（一）组织起源

对培养材料应说明起源于哪个胚层，什么器官及组织；来源于什么样的供体，患有何种疾病。此外，还可进行一些特定的免疫细胞化学染色方法，如中间丝单克隆抗体等，辅助鉴别细胞的来源。

（二）形态学观察

主要观察细胞一般形态，如细胞形状、核形比例、染色质和核仁大小及多少，以及细胞骨架的排列等。培养癌细胞多呈多角形，大小异形性明显，核质比例倒置，有丰富的三极或多极有丝分裂，核仁清晰、多个，微丝、微管排列紊乱等。

（三）细胞生长特征

检测细胞生长曲线、细胞核分裂指数、倍增时间以及细胞周期等。肿瘤细胞失去正常的接触抑制，细胞呈多层生长，生长旺盛，倍增时间缩短，细胞生长密度增加，细胞核分裂指数较高，并具无限增殖能力、细胞浸润能力较强等特性。

（四）软琼脂培养

肿瘤细胞在低密度下仍具有较高的存活率，并可在软琼脂中形成细胞克隆集落。

（五）细胞核型分析

检测核型特点，染色体数量，有无标记染色体，染色体带型等，肿瘤细胞大多为异倍体、多倍体，并有标记染色体。

（六）动物致癌试验

将肿瘤组织或者肿瘤细胞移植于裸鼠体内，建立裸鼠移植瘤模型，移植后的人体瘤在裸鼠体内仍然保持其原有的组织学形态与原发瘤相似。具体方法见后续裸鼠移植模型的构建章节。

（七）组织化学检查

肿瘤细胞中脱氧核糖核酸、酸性磷酸酶和磷脂增多，碱性磷酸酶下降，乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶活性也改变。可以采用免疫组织化学染色法观察比较这些改变。应用ELISA的方法检测相应酶活力的改变。

（八）凝集实验

凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。肿瘤细胞表面某些凝集素使肿瘤细胞往往具有高度的自身凝集作用，凝集力增强。主要方法是取去皮土豆块茎2g，用PBS浸泡2小时后，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。在载玻片上滴一滴土豆凝集素，再滴一滴肿瘤细胞悬液，静置20分钟，低倍显微镜下观察细胞凝集现象。