1．细胞内糖类染色方法过碘酸席夫反应法（periodic acid Schiff reaction, PAS）是一种细胞内的糖类染色方法。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖的乙二醇基（CHOH-CHOH )氧化成两个游离的醛基，它们与Schiff试剂反应生成紫红色产物。PAS显示的多糖除糖原外，还包括黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖脂等。

【材料】

(1)被检细胞：贴壁细胞常用盖玻片培养法的盖片培养物，悬浮细胞可用离心甩片机制备。

(2）染液制备

1) Schiff试剂：将0.5g碱性品红加入100m1沸水中，搅拌条件下煮5分钟，使之充分溶解，冷却至50℃时过滤，加入10ml的1 mol/L HCl，冷却至25℃时加入0.5 g偏重亚硫酸钠，室温下静置24小时，其颜色呈褐色或淡黄色，加入0.5g活性炭摇1分钟，过滤，滤液为无色。置棕色瓶密封，4℃暗处保存。一般可保存数月。

2) 0.5％过碘酸

3）卡诺（Carnoy）固定液配方：60ml纯乙醇加30ml氯仿和l0ml冰醋酸。

4）甲醛钙固定液配方：甲醛10ml,CaCl₂ 1g，加水至l00ml。

5）梯度浓度50%,70%,80%,90%,95% ,100％乙醇，二甲苯与光学树脂等。

【方法】

以盖片培养法为例：

（1）Hanks液洗3次。

(2）卡诺（Carnoy）固定液或甲醛钙固定液固定5～10分钟。

（3)加入0.5％过碘酸作用10～15分钟，用蒸馏水洗3次。

(4)移入Schiff试剂作用15～30分钟，盖片样品稍稍变红。用自来水洗2分钟，盖片样品变红，再用蒸馏水冲洗。

(5)梯度乙醇溶液脱水：经50%,70%,80%,90%,95%,100％乙醇逐级脱水，各2分钟。

(6)二甲苯透明，光学树脂封片后观察。

【结果】

细胞含糖原区呈紫红色。

2．细胞的脂类染色法—苏丹红Ⅲ染色法脂类包括的范围很广，有单纯脂、复合脂、衍生脂等。脂类不溶于水，易溶于乙醇、苯、乙醚等。故制作脂类标本，一般不用石蜡切片，而用冷冻切片或铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定剂。

【材料】

(1)苏丹红Ⅲ染色液：苏丹红Ⅲlg溶于温的70％乙醇中过滤备用。

(2）甘油明胶（配方：明胶12g，加入120ml蒸馏水中水浴加温使其完全溶解，再加入60ml甘油和lg苯酚，充分混匀后）。

【方法】

以盖片培养法为例：

(1)将长满细胞的盖片用Hanks液洗3次。再用甲醛钙固定液固定20分钟。

(2）用蒸馏水洗3次后，再用70％乙醇洗3次。

(3）滴加苏丹红Ⅲ染色液覆盖细胞盖片样品，染色10～30分钟。

(4）用70％乙醇洗3次，再用甘油明胶封片后观察。

【结果】

细胞含脂类的区域呈橘红色。

3. Feulgen反应显示DNADNA经弱酸（1 mol/L HC1）水解后，DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的糖昔键被打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。此法既可以定位又可以用显微分光光度计定量分析。

【材料】

(1) Schiff试剂的配制同特殊染色PAS法；

(2) 0.5％的亮绿水溶液；

（3）1 mol/L HCl：浓盐酸8.5ml，蒸馏水91.5ml。

【方法】

以盖片培养法为例：

(1)取长满贴壁细胞的盖玻片，先用Hanks液洗3次。

(2）用卡诺（Carnoy）固定液固定10分钟，再用蒸馏水洗3次。

(3)将盖玻片移入60℃ l mol/L HCl中10分钟，再移入蒸馏水中稍加漂洗。

(4)移入Schiff试剂中作用30～60分钟，并随时检查显色情况。

(5）移入自来水中洗5分钟，再移入蒸馏水中洗3次。

(6）用0.5％的亮绿水溶液复染色1～3分钟。

(7）用不同浓度（50%,70%,80%,90%,95%, 100%）乙醇逐级脱水，各浓度脱水2分钟。

(8)二甲苯透明，光学树脂封片后观察。

【结果】

细胞核内DNA呈紫红色，细胞质呈绿色。

4．甲基绿-派洛宁（methyl green-pyronin method）显示DNA和RNA甲基绿、派洛宁为两种碱性染料，能与带负电荷的磷酸根形成盐。甲基绿分子有2个正电荷，易与双链DNA结合使其显示绿色；派洛宁分子有1个正电荷，易与单链RNA结合使其显示红色。也有人认为染色原理与核酸分子的空间构型有关。

【材料】

(1) 0.2mol/L醋酸缓冲液（pH 4.8)：取冰醋酸1.2ml加蒸馏水100m1，使用时加2.72g醋酸钠（NaAc·3H₂0)，待完全溶解后，即可使用。

(2)甲基绿-派洛宁染色液：取2g甲基绿加入100ml 0.2mo1/L醋酸缓冲液（pH 4.8)中作为A液；取lg派洛宁加入100ml 0.2mo1/L醋酸缓冲液（pH 4.8)中作为B液。使用时将A,B液按5：2混合。

【方法】

以盖片培养法为例：

（1)取长满贴壁细胞的盖玻片，先用Hanks液洗3次。

(2)用70％乙醇溶液固定10分钟，取出后晾干。

(3）滴加甲基绿一派洛宁染色液覆盖细胞盖片样品，染色15分钟，再用蒸馏水洗3次。

(4）用95％乙醇分色，晾干。

(5)经二甲苯透明，用光学树脂封片后观察。

【结果】

细胞核内因含DNA呈绿色，细胞质及核仁因含RNA呈红色。