活细胞对光线是透明的，光线通过活细胞时，波长和振幅几乎没有改变，所以用普通显微镜无法看清未经染色的活细胞。为了观察活细胞的结构，需要借助于相差显微镜。相差显微镜利用了光的衍射和干涉特征，将透过标本不同区域的光波的光程差转变为振幅差。此功能是在普通显微镜上增加了两个部件获得的，一是在聚光镜上加了一个环状光阑，使透过聚光器的光线形成空心光锥，聚焦到标本上；二是在物镜的后焦面上加了一个相板，相板有一个环形区，其大小整好通过环形光阑束的直射光，相板各区镀以不同物质，使得通过环形区的光比通过相板其他部位的光超前或滞后1/4波长，使细胞内各种结构之间呈现清晰可见的明暗对比。

【原理】

相差显微镜利用光在通过不同物质时的折射和物体厚度差别，产生衍射而引起的光程变化，光程的变化引起相位差即相差的变化来观察物体变化。相差显微镜能将通过标本的可见光的光程差变为以明暗显现的振幅差，从而提高了各种结构之间的对比度，使标本的各种结构变得清晰可见，主要用来观察培养的活细胞的生活特性，如细胞的生长、发育、分裂、分化、衰老、死亡，以及在此过程中细胞形态和内部结构的连续变化。

【方法】

1．调整好相差显微镜先将显微镜合轴，将视野光圈开大并与聚光器光阑边缘一致。调好相位板，使聚光器相位板号与接物镜放大倍数（相位板）相一致。然后抽出接目镜，换上调中目镜，旋动调中目镜筒并调整聚光器的相位板，使视影中两个大小一样的光环相互吻合。再重新换上原接目镜，即成相差图像。当更换不同位数接目镜时，需按上述过程重新调节。

2．观察培养瓶（皿）的准备准备观察的培养瓶要平坦，质地均匀，透光度好（在观察前将培养瓶擦净）。

3．调光主要调整照明光的照明度和光轴，令视野照明均匀。首先用低倍镜，并把照明灯虹彩关至最小，使光落于视野中央；如有偏斜可用聚光器的调整螺丝进行调整。然后打开虹彩使视野内呈均匀照明强度，并使目的物图像达到最大限度反差为止。

4．调焦与摄影较高级的相差显微镜视野中间都有双线十字，调焦前先转动目镜使十字的双线清晰，然后再用调焦旋钮调节物镜，是观察物体清晰。

5．观察细胞生长在瓶底上的细胞最适宜用倒置相差显微镜观察，而且需附长焦距聚光器才能观察厚度较大的培养瓶（皿）。

【注意事项】

1．当换不同倍率的接物镜时，要选好一致的相板和相环，并重新调中。否则成像效果不佳。

2．载物片或培养瓶的表面要平整、均匀、干净，标本不能太厚，而且标本要在有水的环境中（如培养瓶的培养液，水封片等）才好成像，否则影响观察效果。

3．光路上最好有单色（如黄绿色）滤光片，使相差显微镜的分辨力达到最高。