5.操作步骤

(1)试样制备

①取样：取蔬菜试样擦净，去掉非可食部分后备用。

②提取：称取20g蔬菜试样于组织捣碎杯中，加入30mL丙酮和30mL石油醚，于捣碎机上捣碎2min，捣碎液经抽滤，滤液移入250mL分液漏斗中，加入100mL 2%硫酸钠水溶液，充分摇匀，静置分层，将下层溶液转移到另一个250mL分液漏斗中，用2×20mL石油醚萃取，合并三次萃取的石油醚层，过无水硫酸钠层，于旋转蒸发仪上浓缩至10mL。

③净化

层析柱制备：层析柱自下而上依次装入1cm高的无水Na2SO4、5g脱活的弗罗里硅土、1cm高的无水Na₂SO₄，轻轻敲实待用。

净化：取填充好的层析柱，用20mL石油醚淋洗净化柱，弃去淋洗液，当此20mL石油醚液面到达上层硫酸钠顶部时，迅速吸取试样提取液2mL上柱，用100mL石油醚-乙酸乙酯(95+5)洗脱，收集洗脱液于蒸馏瓶中。

④浓缩：将蒸馏瓶于旋转蒸发仪上浓缩至近干，用少量石油醚多次溶解残渣于刻度离心管中，最终定容至1.0mL，供气相色谱分析。

(2)测定

①气相色谱参考条件：

色谱柱：石英弹性毛细管柱，0.25mm(内径)×15m，内涂有OV-101固定液。

温度：柱温自180℃升至230℃，保持30min；检测器250℃，进样口250℃。

气流条件：氮气40mL/min，尾吹气60mL/min，分流比1：50。

②色谱分析：吸收1uL试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高。再吸取1uL混合标准使用液进样，记录色谱峰的保留时间和峰高。

根据组分在色谱上的出峰时间与标准组分定性：测得目标物的保留时间(RT)要与农药标准品扫描表保留时间(RT)相符(先出峰的RT误差≯0.005min，后出峰RT误差≯0.01min)。

用外标法与标准组分比较定量。

③色谱图：14种有机氯和拟除虫菊酯类农药的色谱图见图6-3。

图6-3 14种有机氯和拟除虫菊酯类农药的色谱图

6.结果计算

式中x_i——试样中农药的含量，mg/kg

m_i——标准品中i组分农药的含量，ng

V₁——试样进样体积，uL

V₂——最后定容体积，mL

h_si——标准品中i组分农药峰高，mm

h_i—试样中i组分农药峰高，mm

m₂——试样的质量，g

7.要点提示

(1)试样制备：先将样品在食品粉碎机中打碎，均匀化，打碎过程中可加入适量干冰，用来抑制某些样品(葱，韭等)中酶的活力。

(2)试验中用到的所有玻璃器皿使用前都必须用适量丙酮淋洗，以去除可能存在的杂质，避免引入杂质，干扰检测结果。

(3)所有的转溶过程都必须用适量(5mL左右)石油醚多次淋洗，以最大程度减少分析物的损失，比如“捣碎液经抽滤，滤液移入250mL分液漏斗中”，抽滤漏斗要用石油醚多次淋洗，淋洗液一并转入250mL分液漏斗中。

(4)分液漏斗使用前，活塞需薄薄地涂上一层润滑脂，塞好后将活塞旋转几圈，使润滑脂均匀分布，关好活塞，将分液漏斗放在提取架上。萃取时手持分液漏斗进行振摇，开始时摇晃几次要将分液漏斗下口向上倾斜(朝向无人处)，打开活塞，使过量的气体放出，关闭活塞后再进行振摇，如此重复至放气时只有很小压力，再剧烈振摇3～5min后，将分液漏斗放回架上静置分层。

(5)某些样品在液液萃取时可能会发生乳化现象，可以通过长时间静置，适当升高温度，加入适量氯化钠振摇，加入适量石油醚，离心，超声等方式破除乳化现象。

(6)如果样品为含油基质，如粮谷类样品，在液液萃取蒸干后增加以下去油处理步骤：将浓缩残渣用5mL正己烷分次洗入250mL分液漏斗中。加入50mL正己烷饱和的乙腈，振荡5min，静置分层，收集下层乙腈层，剩余正已烷层再次加入50mL正已烷饱和的乙腈，振荡5min，静置分层。收集下层乙腈层，40℃下旋转浓缩至近干，进行下一步过层析柱步骤。

(7)净化时整个洗脱过程要保持层析柱不能干涸，否则会影响目标物的提取率。

(8)减压浓缩时石油醚易暴沸，浓缩瓶中可加入几个玻璃珠防沸，或实时观察，旋松放气口，稍微调整放气，达到增压止沸的目的。

(9)浓缩过程蒸至近干即可，否则可能导致某些挥发性强的化合物损失。

相关链接：蔬菜中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定（一）

文章来源：《食品理化检测技术》

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