维生素A存在于动物性脂肪中。维生素A的测定有三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光法、气相色谱法和高效液相色谱法等方法，其中比色法应用最为广泛。这里介绍三氯化锑比色法(依据GB/T5009.82-2003第二法)。

1.原理

维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，产生蓝色可溶性络合物，其颜色深浅与溶液中所含维生素A的量呈正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测定其吸光度，与标准曲线对照，即可求得维生素A的含量。按下式计算：

式中x——样品中维生素A的含量，mg/100g(如按国际单位，每1国际单位=0.3ug维生素A)

p——由标准曲线上查得样品溶液中维生素A的含量，ug/mL

p₀——由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，ug/mL

m——样品质量，g

V——提取后加三氯甲烷定量之体积，mL

2.要点提示

(1)由于维生素A极易被光破坏，测定过程应尽量避免强烈光照或采用棕色玻璃器皿。

(2)样品处理时要用到乙醚或其他醚，使用前要先检查醚中是否含有因存放时间长而与空气接触或经光照后生成的过氧化物，避免蒸馏时发生爆炸。

①检查方法：加入等体积的2%碘化钾醋酸溶液，如果含有过氧乙醚，会游离出碘，使淀粉溶液变成紫色或蓝色。

②处理方法：瓶中放入少量纯铁丝或铁屑，重蒸乙醚，弃去10%初馏液和10%残馏液。

另外应注意，乙醚作为萃取剂，易发生乳化现象，在提取前，洗涤操作不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇消除乳化。

(3)三氯甲烷中不能含有分解物，否则会破坏维生素A。

①检查方法：三氯甲烷不稳定，放置后易受空气中氧的作用生成氯化氢和光气。检查时可取少量三氯甲烷置试管中加少量水振摇，使氯化氢溶解到水层。加入几滴硝酸银溶液，如有白色沉淀即说明三氯甲烷中有分解产物。

②处理方法：三氯甲烷中如含有分解产物，应在分液漏斗中加水洗数次，加无水硫酸钠或氯化钙使之脱水，然后蒸馏。

(4)反应液中不能含有水分，否则三氯化锑遇水会出现氯氧化锑沉淀，干扰比色测定。

SbCl₃+H₂O→SbOCl↓+2HCl

因此，在每1mL三氯甲烷中加入1滴乙酸酐来吸收可能混入反应液中的微量水分。

(5)由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常6s以后就开始褪色，因此要求反应在比色杯中进行，产生蓝色后立即读取吸光值。

(6)如果样品中含β-胡萝卜素干扰测定，可将浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮-己烷混合液为洗脱剂进行柱层析。

(7)三氯化锑溶液吸湿性强、易变质，腐蚀性强，不能沾在手上，三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。

文章来源：《食品理化检测技术》

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