g.小心地打开瓶塞，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶。如果两相界面低于小球与瓶身相接处，则沿瓶壁边缘慢慢地加入水，使液面高于小球和瓶身相接处(见图3-3)，以便于倾倒。

h.将上层液尽可能地倒入已准备好的加入沸石的脂肪收集瓶中，避免倒出水层(见图3-4)。

图3-3倾倒醚层前

图3-4倾倒醚层后

i.用少量混合溶剂冲洗瓶颈外部，冲洗液收集在脂肪收集瓶中。要防止溶剂溅到抽脂瓶的外面。

j.向抽脂瓶中加入5mL乙醇，用乙醇冲洗瓶颈内壁，按c所述进行混合。重复d～i操作，再进行第二次抽提，但只用15mL乙醚和15mL石油醚。

k.重复c～i操作，再进行第三次抽提，但只用15ml乙醚和15mL石油醚。

l.合并所有提取液，即可采用蒸馏的方法除去脂肪收集瓶中的溶剂，也可于沸水浴上蒸发至干来除掉溶剂。蒸馏前用少量混合溶剂冲洗瓶颈内部。

m.将脂肪收集瓶放入(102±2)℃的烘箱中加热1h，取出脂肪收集瓶，冷却至室温，称量，精确至0.1mg。

n.重复m操作，直到脂肪收集瓶两次连续称量差值不超过0.5mg，记录脂肪收集瓶和抽提物的最低质量。

o.为验证抽提物是否全部溶解，向脂肪收集瓶中加入25mL石油醚，微热，振摇，直到脂肪全部溶解。如果抽提物全部溶于石油醚中，则含抽提物的脂肪收集瓶的最终质量和最初质量之差，即为脂肪含量。

p.若抽提物未全部溶于石油醚中，或怀疑抽提物是否全部为脂肪，则用热的石油醚洗提。小心地倒出石油醚，不要倒出任何不溶物，重复此操作3次以上，再用石油醚冲洗脂肪收集瓶口的内部。最后，用混合溶剂冲洗脂肪收集瓶口的外部，避免溶液溅到瓶的外壁。将脂肪收集瓶放入(102±2)℃的烘箱中，加热1h，按m和n中操作。

q.取n中测得的质量和p中测得的质量之差作为脂肪的质量。

(5)结果计算

式中x——样品中脂肪含量，g/100g

m——样品的质量，g

m₁——n中测得的脂肪收集瓶和抽提物的质量，g

m₂——脂肪收集瓶的质量，或在有不溶物存在下，p中测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量，g

m₃——空白试验中，脂肪收集瓶和n中测得的抽提物的质量，g

m₄——空白试验中脂肪收集瓶的质量，或在有不溶物存在时，p中测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量，g
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

(6)要点提示

①精密度要求：在重复性条件下获得的两次独立测定结果之差应符合：脂肪含量≥15%，≤0.3g/100g；脂肪含量5%～15%，≤0.2g/100g；脂肪含量≤5%，≤0.1g/100g。

②乳类脂肪虽然也属游离脂肪，但因脂肪球被乳中酪蛋白钙盐包裹，又处于高度分散的胶体分散系中，故不能直接被乙醚、石油醚提取，需预先用氨水处理，故此法也称为碱性乙醚提取法。加氨水后，要充分混匀，否则会影响下步醚对脂肪的提取。

③刚果红溶液可选择性地使用，目的是使溶剂和水相界面清晰，也可使用其他能使水相染色而不影响测定结果的溶液。

④操作时加入氨的作用是破坏脂肪球膜。加入乙醇的作用是沉淀蛋白质以防止乳化，并溶解醇溶性物质，使其留在水中避免进入醚层，影响结果。加入石油醚的作用是降低乙醚极性，使乙醚与水不混溶，只抽提出脂肪，并可使分层清晰。

⑤如果产品中脂肪的质量分数低于5%，可只进行两次抽提。

⑥若无抽脂瓶，可用100mL具塞量筒代替。

相关链接：食品中脂肪测定的其他方法（一）

文章来源：《食品理化检测技术》

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