中药及其制剂均为多组分的复杂体系，任何一种单一成分不可能代表该中药的整体质量；中药也不是多种成分药性单一的简单累加，因为不是单一直接的“药”、“靶”对应，尤其是中药复方制剂更是如此。以“中药指纹图谱”鉴别中药的真伪，控制其质量，较传统方法更能客观地反映中药及其制剂物质基础的整体观，进而对药品质量进行整体描述和评价，是更为科学、有效的质量控制方法。

以指纹图谱作为中药(天然药物)提取物及其制剂的质量控制方法，目前已成为国际公认的最有效的方法和手段。美国食品药品管理局(FDA)允许草药保健品申报资料中提供色谱指纹图谱；世界卫生组织(WHO)在1996年草药评价指导原则中规定，如果草药的活性成分不明确，可以提供色谱指纹图谱以证明产品质量的一致；欧共体在草药质量指南中称，单靠测定某种有效成分考查质量的稳定性是不够的，因为草药及其制剂是以整体为活性物质；日本汉方药在20世纪80年代就采用高效液相指纹图谱控制质量。国外指纹图谱的应用，目的在于解决成分复杂，有效成分不明确的植物药质量检测和产品批次间质量差异的问题。其中德国研制的银杏叶提取物制剂，应用指纹图谱制定了相应的标准，该图谱体现了制剂所含的33个化学成分(主要为黄酮类和内酯类)和各自的含量，经化学成分和药效相关性研究，发现约24%银杏黄酮和约6%银杏内酯组成的提取物具有最佳疗效。

2000年，原国家药品监督管理局颁布了《中药注射剂指纹图谱研究技术要求(暂行)》，要求中药注射剂必须进行指纹图谱的研究，并建立其相关的质量标准，规范了中药指纹图谱检测方法的研究，促进了几年来对指纹图谱研究的进展。2005年，中药指纹图谱正式被纳入《中国药典》，当时只收载一个品种，2010年版《中国药典》收载6个品种。

一、中药指纹图谱的相关概念

中药指纹图谱(fingerprint technology of Chnese medicine)，是借鉴法医学“指纹”的概念，包括中药DNA指纹图谱、蛋白质指纹图谱和化学指纹图谱等，我们现在所说的指纹图谱是指化学指纹图谱。化学指纹图谱分析是一种从整体上研究复杂物质体系的技术工具，已经在环保、石油勘探、食品、药品评价等许多领域中得到广泛应用。由于它具有指纹特征分析、谱图整体分析、宏观推断分析等特点，适合于分析复杂化学物质组成的稳定性，目前已成为中药乃至天然产物质量评价研究领域的重要方法和手段。

(一) 特征图谱

特征图谱可以算是指纹图谱的前身。在没有指纹图谱软件以前，相似度都是纯手工算出来的，现在的指纹图谱只要将色谱图导进去，选择合适的算法，相似度、峰面积和保留时间的RSD值均会自动计算出来。一般只要色谱图峰形相近，峰面积差距不悬殊，均会有很高的相似度。特征图谱，不要求相同的色谱峰越多越好，要求在色谱图中选定一个参照峰(一般是峰面积较大，分离度较好的主峰)，计算其他峰的相对峰面积和相对保留时间及其RSD值，标准中要求相对保留时间在±5%以内符合要求(实际2%～5%均可)，其RSD值在3%以内，相对峰面积的RSD值在5%以内，不需要计算相似度，方法学考察也包括峰面积和保留时间在内。

(二) 特征指纹图谱

特征指纹图谱是指某种(或某产地)中药材或中成药中所共有的、具有特异性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。通过指纹图谱的特异性，能有效鉴别样品的真伪或产地；通过指纹图谱主要特征峰的含量或比例的制定，能有效控制样品的质量，确保样品质量的相对稳定。因此，在有效成分不完全明确的前提下，特定中药材或中成药的特征指纹图谱，对于有效地控制中药材或中成药的质量具有重要的意义。

(三) 中药指纹图谱

我国著名的中药质量研究专家谢培山教授，首先对中药指纹图谱给出以下定义：中药指纹图谱是一种综合的、可量化的色谱鉴定手段，借以鉴别真伪，评价原料药材、半成品和成品质量均一性和稳定性。其基本属性是“整体性”和“模糊性”。“模糊性”强调的是对照品和待测样品指纹图谱的相似性，而不是完全相同；“整体性”是强调、比较色谱特征的“完整面貌”，而不是讲其“肢解”。这样，才能在不同环境下的样品色谱中搜索和提取出与该药材指纹图谱整体的“面貌”，相似的特性，加以鉴别。所以说，色谱特征是“整体性”及“模糊性”是中药指纹图谱分析的基本属性。

中药指纹图谱更确切地说，是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，利用光谱法或色谱法手段测定，得到的能够标示其化学特征的色谱图(即中药色谱指纹图谱)或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。其中，中药色谱指纹图谱本质上是HPLC、TLC、GC等色谱技术在药物检测方法应用上的延伸，能够反映中药内在质量的整体变化情况和质量的均一程度，可以控制产品批与批间的稳定性差异。最先发展起来的是中药化学成分色谱指纹图谱，特别是高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。

二、常见中药指纹图谱及其应用

目前，中药指纹图谱技术已涉及薄层扫描(TLCS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和高效毛细管电泳法(HPCE)等色谱法，以及紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)、质谱法(MS)、核磁共振法(NMR)和X射线衍射法等光谱法。其中色谱方法应用较为广泛。目前，HPLC、TLCS和GC已成为公认的三种常规分析手段。

(一) 常见中药指纹图谱

1. 薄层色谱指纹图谱(TLC Fingerprinting)薄层色谱指纹图谱具有操作简单、分析速度快速、一次可分析多个样品、提供信息量大、色谱鲜明等特点。用固定波长对薄层展开的各个斑点进行扫描，所得扫描图谱比目测的层析图谱更加客观准确，因此具有较好的指纹鉴别意义。其缺点是由于受薄层板的质量和开放式层析系统等外界因素的影响，如果操作不规范，重现性和精密度将会受到影响，在指纹图谱应用中常受到一定的限制。

2. 气相色谱指纹图谱(GC Fingerpriig)气相色谱是封闭性色谱，受外界影响较少，具有高性能、高选择性、高灵敏度等优点。适于中药材及制剂中含挥发性成分指纹图谱的研究，使用的检测器一般为氢火焰离子化检测器(FID)。

3. 高效液相色谱指纹图谱(HPLC Fingerprinting)高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快、定量精密度高、检测器种类多和稳定性好等特点，不受样品挥发度和热稳定性的限制，比气相色谱法应用范围更广：HPLC可以把复杂的化学成分进行分离而形成高低不同的峰组成一张色谱图，这些色谱峰的高度和峰面积分别代表了各种不同化学成分和含量。由此可见，中药指纹图谱不但有特征的体现(各种化学成分的个数和相对位置-保留时间)可用于定性鉴别，而且还体现了量的概念。峰高度和峰面积表示了某个化学成分的含量，而各峰的峰高(或峰面积)的比值，体现了各种化学成分间的相对含量。因此，中药指纹图谱不仅可以进行个体、某物种的“特征性”鉴定，还可以将其特征予以“量化”。

4. 分子生物学指纹图谱(DNA Fingerprinting)利用聚合酶链反应，从不同生物样品中人工合成DNA片断，而这种DNA片断的大小、数口可因不同的生物而异，故称之为DNA指纹图谱。DNA技术具有重复性好、灵敏度高等优点。限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)是最常用的构建DNA指纹图谱的方法，但该法费时费力，应用受到一定限制。随机扩增多态DNA(RAPD)标记，可以在特异DNA序列尚不清楚的情况下，检测DNA的多态性，是构建中药指纹图谱的新方法，具有极好的应用前景。

(二) 中药指纹图谱技术的应用

通过专属性鉴别和多指标成分的定量分析，以及色谱图中各色谱峰的顺序、面积、比例、相对保留时间，可以表达某个品种特有的化学特征。使用各种方法建立中药材及制剂的指纹图谱，以及对相应信息进行数字化处理，能够更有利于评价和控制中药材及制剂的质量。1.中药指纹图谱技术在《中国药典》中的应用2005年版《中国药典》一部，收载高效液相色谱特征图谱1项；2011年，国家食品药品监督管理局乂批准颁布了13个中药注射剂的标准，均收载有指纹图谱检测项目。2015年版《中国药典》一部标准中，丹参总酚酸提取物、丹参酮提取物等13个品种收载有指纹图谱检测项目；收载指纹图谱6项，有桂枝茯苓胶囊、天舒胶囊、复方丹参滴丸、注射用双黄连(冻干)、腰痛宁胶囊、诺迪康胶囊等；在植物油和提取物中有8个品种收载了特征图谱，有人参茎叶皂苷提取物、人参皂苷提取物、山楂提取物、连翘提取物、肿节风浸膏、茵陈提取物、找术油、满山红油等。按照指纹图谱的检测方法和原理，建立HPLC特征图谱，以对照药材和对照品作对照，分别绘制对照指纹图谱与供试品指纹图谱比较，确定特定的药味。如乌灵胶囊、百令胶囊建立特征图谱，可区别其他发酵菌粉。色谱指纹图谱技术的应用，提高了中成药鉴别的专属性，有效地控制了中药整体质量的变化、均一程度、中药质量的稳定性和有效性。

2. 中药指纹图谱的应用范围

(1) 基原鉴定：中药材的品种鉴别是保证药品质量和用药安全有效的源头，通过指纹图谱特征峰，可以对其植物进行基原鉴定。

(2) 评价中药材质量：中药指纹图谱可用于中药研究、生产各个阶段的中药材质量控制；用于中药材GAP基地建设、中药材种植规范、优良品种的选择和药材道地性的评价。

(3) 中成药的质量监控：中药指纹图谱可作为中药制剂的质量控制指标，用于评价产品质量的稳定性和生产工艺的合理性。

相关链接：中成药的鉴别（四）

文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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