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中成药的鉴别(四)

发布时间:2020-09-04 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1050

3. 色谱法鉴别色谱法根据分离方法分为纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。所用溶剂应与供试品不起化学反应,纯度要求较高,分析时的温度,除气相色谱法或另有规定外,系指在室温下操作。分离后各成分的检出,应采用各品种项下所规定的方法。采用前三种色谱法分离有色物质时,可根据其色带进行区分。分离无色物质时,可在短波(254nm)或长波(365nm)紫外光灯下检视。

(1) 纸色谱法:纸色谱法系以纸为载体,以纸上所含水或其他物质为固定相,用展开剂展开的分配色谱。可用于药品的鉴别、纯度检查和含量测定。用作药品鉴别时,供试品在色谱图中所显主斑点的位置与颜色(或荧光),应与对照标准物质在色谱图中所显主斑点相同;用作药品纯度检查时,取一定量的供试品,经展开后,按各品种项下的规定,检视其所显杂质斑点的个数和旱色深度(或荧光强度);进行药品含量测定时,将待测色谱斑点剪下经洗脱后,再用适宜的方法测定。

1) 原理:由于滤纸具有较强的吸附性,干燥的滤纸含有6%~7%的水,这些水分是通过氢键与纤维素上的羟基相结合。通过滤纸的表面吸附与毛细作用可吸附20%~30%的水分,也可吸留其他物质,如缓冲液作为固定相。点样后,在该流动相中多次分配,根据两项中的分配系数差异而被分离。

2) 仪器与材料:①展开容器:通常为圆形或长方形玻璃缸,缸上具有磨口玻璃盖,应能密闭。用丁下行法时,盖上有孔,可插入分液漏斗,用以加入展开剂。在近顶端有一用支架架起的玻璃槽作为展开剂的容器,槽内有一玻棒,用以压住色谱滤纸。槽的两侧各支一玻棒,用以支持色谱滤纸使其自然下垂;用于上行法时,在盖上的孔中加塞,塞中插入玻璃悬钩,以便将点样后的色谱滤纸挂在钩上,并除去溶剂槽和支架。②点样器:常用具支架的微量注射器(平门)或定量毛细管(无毛刺),应能使点位置正确、集中。③色谱滤纸:质地均匀平整,具有一定的机械强度,不含影响展开效果的杂质;也不应与所用展开剂起作用,以致影响分离和鉴别效果,必要时可进行处理后再用。用丁下行法时,取色谱滤纸按纤维长丝方向切成适当大小的纸条,离纸条上端适当的距离(使色谱滤纸上端能足够浸入溶剂槽内的展开剂中,并使点样基线能在溶剂槽侧的玻璃支持棒下数厘米处)用铅笔画点样基线,必要时,可在色谱滤纸下端切成锯齿形便于展开剂向下移动;用于上行法时,色谱滤纸长约25cm,宽度则按需要而定,必要时可将色谱滤纸卷成筒形。点样基线距底边约2.5cm。
3) 操作方法:①下行法:将供试品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液。用微量注射器或定毛细管吸取溶液,点于点样基线上,一次点样量不超过10ul。点样量过大时,溶液宜分次点加,每次点加后,待其白然干燥、低温烘干或经温热气流吹干,样点直径为2~4mm,点间距离约为1.5~2.0cm,样点通常应为圆形。将点样后的色谱滤纸的点样端放在溶剂槽内并用玻棒压住,使色谱滤纸通过槽侧玻璃支持棒自然下垂,点样基线在支持棒下数厘米处。展开前,展开缸内用各品种项下规定的溶剂蒸气使之饱和,一般可在展开缸底部放一装有规定溶剂的平皿,或将被规定溶剂润湿的滤纸条附着在展开缸内壁上,放置一定时间,待溶剂挥发使缸内充满饱和蒸气。然后小心添加展开剂至溶剂槽内,使色谱滤纸的上端浸没在槽内的展开剂中。展开剂经毛细作用沿色谱滤纸移动进行展开,展开过程中避免色谱滤纸受强光照射。展开至规定的距离后,取出色谱滤纸,标明展开剂前沿位置,待展开剂挥散后,按规定方法检测色谱斑点。②上行法:点样方法同下行法。展开缸内加入展开剂适量,放置待展开剂蒸气饱和后,再下降悬钩,使色谱滤纸浸入展开剂约1cm,展开剂即经毛细作用沿色谱滤纸上升,除另有规定外,一般展开至约15cm后,取出晾干,按规定方法检视。展开可以单向展开,即向一个方向进行;也可进行双向展开,即先向一个方向展开,取出,待展开剂完个挥发后,将滤纸转动90°,再用原展开剂或另一种展开剂进行展开;亦可多次展开和连续展开等。

(2) 层色谱法(TLC):原理及操作方法详见第七章。

(3) 气相色谱法(GC):原理及操作方法详见第八章。对照品可以为该味中药的有效成分,也可以为原药材的制备液。最适宜的制剂样品为含有挥发油或挥发性成分的制剂。固体样品要制成溶液,但应了解溶剂的峰位。大分子或不挥发性成分可分解或制成衍生物。

(4) 高效液相色谱法(HPLC):原理及操作方法详见第九章。应用高效液相色谱法进行定性鉴别与气相色谱法有很多相似之处。主要是利用化合物在特定的色谱柱上,在一定条件下的保留值与其对照品在同一条件下,进行保留时间的直接比较作为鉴别依据。

对于复杂组分尚可采用联机技术,如本法与质谱联用,先分离后再作定性鉴别。高效液相色谱法不受样品挥发性的限制,流动相、固定相可选择的种类多,检测手段多样,所以应用范围比气相色谱法广泛。

目前在中药制剂的质量标准中,一般很少单独使用气相色谱法、高效液相色谱法作鉴别,而是多与含量测定结合进行。

 

 

文章来源:《实用中药药品检验检测技术指南》

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