A.1 安全提示

本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，使用时需小心谨慎并按相关规定操作。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。使用易燃品时，严禁使用明火加热。

A.2 一般规定

本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及其制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.3 鉴别试验

A.3.1 溶解性

易溶于水，微溶于甲醇。

A.3.2 高效液相色谱定性鉴别试验

在L-硒-甲基硒代半胱氨酸的含量试验的色谱操作条件下，试样溶液与标准溶液的L-硒-甲基硒代半胱氨酸色谱峰的保留时间相对差值不超过2%。L-硒-甲基硒代半胱氨酸标准溶液的参考色谱图见附录B。

A.4 L-硒-甲基硒代半胱氨酸(以L-SeMC计)含量的测定

A.4.1 方法提要

采用高效液相色谱法测定。用配位交换型手性色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量计算样品中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的含量。

A.4.2 试剂和材料

A.4.2.1 五水硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)。

A.4.2.2 水：GB/T6682中规定的一级水。

A.4.2.3 五水硫酸铜溶液：0.0004mol/L。准确称取0.1g五水硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)，加水溶解，并定容至1L，摇匀备用。

A.4.2.4 L-硒-甲基硒代半胱氨酸标准品，纯度大于98%。

A.4.3 仪器和设备

高效液相色谱仪：配备紫外检测器和柱温箱，或其他等效的检测器。

A.4.4 参考色谱条件

A.4.4.1 色谱柱：以配位交换型光学活性固定相涂敷于十八烷基硅烷键合硅胶为填料的手性色谱柱，250mm×4mm，粒径5um；或其他等效的色谱柱。

A.4.4.2 流动相：0.0004mol/L五水硫酸铜(CuSO₄.5H₂O)溶液。

A.4.4.3 流动相流速：1.0mL/min。

A.4.4.4 检测波长：240nm。

A.4.4.5 进样量：20uL。

A.4.4.6 柱温：35℃。

A.4.5 分析步骤

A.4.5.1 标准溶液的制备

称取15mg L-硒-甲基硒代半胱氨酸标准品，精确至0.1mg，置于25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准溶液。L-硒-甲基硒代半胱氨酸标准溶液的参考色谱图见附录B。

A.4.5.2 试样溶液的制备

称取30mg试样，精确至0.1mg，置于50mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得试样溶液。

A.4.5.3 测定

在参考色谱条件(A.4.4)下，分别对标准溶液、试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与标准溶液的色谱图相比较，以确定试样溶液色谱图中L-硒-甲基硒代半胱氨酸对应的峰(保留时间tR为9.45min)。记录试样溶液色谱图中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的峰面积和标准溶液色谱图中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的峰面积。

A.4.6 结果计算

L-硒-甲基硒代半胱氨酸(以L-SeMC计)的质量分数wa，按式(A.1)计算：

式中：

m_R——标准溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的质量，单位为毫克(mg)；

m——试样的质量，单位为毫克(mg)；

A_a——试样溶液色谱图中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的峰面积；

A_R——标准溶液色谱图中L-硒-甲基硒代半胱氨酸的峰面积。

试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。

A.5 比旋光度的测定

A.5.1 称取适量试样，精确至0.1mg，用水溶解并定量稀释制成每毫升中约含10mg的溶液。

比旋光度α_m(20℃，D)数值以“(^o)·dm²·kg^-1”表示，按式(A.2)计算：

式中：

a——测得的旋光角，单位为度(o)；

l——旋光管的长度，单位为分米(dm)；

Pa——二溶液中有效组分的质量浓度，单位为克每毫升(g/mL)。

A.5.2 其他按GB/T613进行。

相关链接：食品营养强化剂L-硒-甲基硒代半氨酸

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(五)》

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