1 范围

本标准规定了哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验的基本试验方法和技术要求。

本标准适用于评价受试物对哺乳动物骨髓细胞的遗传毒性。

2 术语和定义

2.1 染色体结构畸变

通过显微镜可以直接观察到的发生在细胞有丝分裂中期的染色体结构变化。如染色体中间缺失和断片，染色体互换和内交换等。结构畸变可分为染色体型畸变(Chromosome-typeaberration)和染色单体型畸变(chromatid-typeaberration)。

2.2 染色体型畸变

染色体结构损伤,表现为在两个染色单体的相同位点均出现断裂或断裂重组的改变。

2.3 染色单体型畸变

染色体结构损伤,表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤。

2.4 染色体数目畸变

染色体数目发生改变,不同于正常核型。

2.5 核内复制

在DNA复制的S期之后,细胞核未进行有丝分裂就开始了另一个S期的过程。其结果是染色体有4、8、16…倍的染色单体。

2.6 裂隙

染色体或染色单体损伤的长度小于一个染色单体的宽度，为染色单体的最小错误排列。

2.7 有丝分裂指数

中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值。

3 试验目的和原理

在试验动物给予受试物后,用中期分裂相阻断剂(如秋水仙素或秋水仙胺)处理,抑制细胞分裂时纺锤体的形成，以便增加中期分裂相细胞的比例，随后取材、制片、染色、分析染色体畸变。

本试验可检测受试物能否引起整体动物骨髓细胞染色体畸变，以评价受试物致突变的可能性。若有证据表明受试物或其代谢产物不能到达骨髓,则不适用于本方法。

4 仪器和试剂

4.1 仪器

实验室常用设备、恒温水浴锅(37℃±5℃)、离心机、生物显微镜。

4.2 试剂

4.2.1 秋水仙素(0.4mg/mL):置于棕色瓶中，冰箱保存。

4.2.2 氯化钾溶液(0.075mol/L)。

4.2.3 固定液：甲醇与冰醋酸以3：1混合，临用时现配。

4.2.4 姬姆萨(Giemsa)储备染液:取Giemsa染料3.8g和少量甲醇于乳钵里仔细研磨,逐渐加入甲醇至375mL,待完全溶解后,再加入125mL甘油，混合均匀。置37℃恒温箱中保温48h。保温期间振摇数次,促使染料的充分溶解。取出过滤,室温保存,两周后使用。

4.2.5 Giemsa应用染液:取1份Giemsa储备染液与9份磷酸盐缓冲液(1/15mol/L)混合而成。临用时配制。

4.2.6 磷酸盐缓冲液(pH6.8)。

4.2.6.1 磷酸氢二钠溶液(1/15mol/L)：磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)9.47g溶于1000mL去离子水中。

4.2.6.2 磷酸二氢钾溶液(1/15mol/L)：磷酸二氢钾(KH₂PO₄)9.07g溶于1000mL去离子水中。

4.2.6.3 取磷酸氢二钠溶液(1/15mol/L)50mL与磷酸二氢钾溶液(1/15mol/L)50mL混合。

4.2.7 阳性对照物：常用环磷酰胺,丝裂霉素C等。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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