6 操作步骤

6.1 样品处理及增菌

按无菌操作称取检样25g(mL),加入盛有225mLm TSB的均质袋中，用拍击式均质器均质1min～2min；或加入盛有225mLm TSB的均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min。若样品为液态，振荡均匀即可。36℃±1℃培养18h~24h。

6.2 分离

将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，36℃+1℃厌氧培养18h～24h,观察菌落形态。溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径2mm～3mm,灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。

6.3 鉴定

6.3.1 分纯培养

挑取5个(如小于5个则全选)可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液，36℃±1℃培养18h～24h。

6.3.2 革兰氏染色镜检

挑取可疑菌落染色镜检。β型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。

6.3.3 触酶试验

挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血性链球菌触酶为阴性。

6.3.4 链激酶试验(选做项目)

吸取草酸钾血浆0.2mL于0.8mL灭菌生理盐水中混匀，再加入经36℃±1℃培养18h~24h的可疑菌的TSB培养液0.5mL及0.25%氯化钙溶液0.25mL,振荡摇匀，置于36℃±1℃水浴中10min)血浆混合物自行凝固(凝固程度至试管倒置，内容物不流动)。继续36℃±1℃培养24h,凝固块重新完全溶解为阳性，不溶解为阴性，β型溶血性链球菌为阳性。

6.3.5 其他检验

使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。

7 结果与报告

综合以上试验结果，报告每25g(mL)检样中检出或未检出溶血性链球菌。

相关链接：食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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