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3.4.3 添加成分的加入
对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃~50℃时再加入。无菌的添加成分在加入前应先放置到室温,避免冷的液体造成琼脂凝结或形成片状物。将加入添加成分的培养基缓慢充分混匀,尽快分装到待用的容器中。
3.4.4 平板的制备和储存
倾注融化的培养基到平皿中,使之在平皿中形成厚度至少为3mm(直径90mm的平皿,通常要加入18mL~20mL琼脂培养基)。将平皿盖好皿盖后放到水平平面使琼脂冷却凝固。如果平板需储存,或者培养时间超过48h或培养温度高于40℃,则需要倾注更多的培养基。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或)5℃±3℃冰箱的密封袋中,以防止培养基成分的改变。在平板底部或侧边做好标记,标记的内容包括名称、制备日期和(或)有效期。也可使用适宜的培养基编码系统进行标记。
将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长储存期限。为了避免冷凝水的产生,平板应冷却.后再装入袋中。储存前不要对培养基表面进行干燥处理。
对于采用表面接种形式培养的固体培养基,应先对琼脂表面进行干燥:揭开平皿盖,将平板倒扣于烘箱或培养箱中(温度设为25℃~50℃);或放在有对流的无菌净化台中,直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。
3.5 培养基的弃置
所有污染和未使用的培养基的弃置应采用安全的方式,并且要符合相关法律法规的规定。
4 质控菌株的保藏及使用
4.1 一般要求
为成功保藏及使用菌株,不同菌株应采用不同的保藏方法,可选择使用冻干保藏、利用多孔磁珠在-70℃保藏、使用液氮保藏或其他有效的保藏方法。
4.2 商业来源的质控菌株
对于从标准菌种保藏中心或其他有效的认证的商业机构获得原包装的质控菌株,复苏和使用应按照制造商提供的使用说明进行。
4.3 实验室制备的标准储存菌株
用于性能测试的标准储存菌株,在保存和使用时应注意避免交叉污染,减少菌株突变或发生典型的特性变化;标准储备菌株应制备多份,并采用超低温(-70℃)或冻干的形式保存。在较高温度下贮存时间应缩短。
标准储存菌株用作培养基的测试菌株时应在文件中充分描述其生长特性。
标准储存菌株不应用来制备标准菌株。
4.4 储存菌株
储存菌株通常从冻干或超低温保存的标准储存菌株进行制备。
制备储存菌株应避免导致标准储存菌株的交叉污染和(或)退化。制备储存菌株时,应将标准储存菌株制成悬浮液转接到非选择培养基中培养,以获得特性稳定的菌株。
对于商业来源的菌株,应严格按照制造商的说明执行。
储存菌株不应用来制备标准储存菌株或标准菌株。
4.5 工作菌株
工作菌株由储存菌株或标准储存菌株制备。
工作菌株不应用来制作标准菌株、标准储存菌株或储存菌株。
文章来源:《食品安全国家标准汇编检验方法(二)》
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