6 血清学分型(选做项目)

6.1 制备

接种两管3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂试管斜面，36℃±1℃培养18h～24h。用含3%氯化钠的5%甘油溶液冲洗3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂斜面培养物，获得浓厚的菌悬液。

6.2 K抗原的鉴定

取一管6.1制备好的菌悬液，首先用多价K抗血清进行检测，出现凝集反应时再用单个的抗血清进行检测。用蜡笔在一张玻片上划出适当数量的间隔和一个对照间隔。在每个间隔内各滴加一滴菌悬液，并对应加入一滴K抗血清。在对照间隔内加一滴3%氯化钠溶液。轻微倾斜玻片，使各成分相混合，再前后倾动玻片1min。阳性凝集反应可以立即观察到。

6.3 O抗原的鉴定

将另外一管的菌悬液转移到离心管内，121℃灭菌1h。灭菌后4000r/mιn离心15min,弃去上层液体，沉淀用生理盐水洗三次，每次4000min离心15min，最后一次离心后留少许上层液体，混匀制成菌悬液。用蜡笔将玻片划分成相等的间隔。在每个间隔内加入一滴菌悬液，将O群血清分别加一滴到间隔内，最后一个间隔加一滴生理盐水作为自疑对照。轻微倾斜玻片，使各成分相混合，再前后倾动玻片1mm。阳性凝集反应可以立即观察到。如果未见到与O群血清的凝集反应，将菌悬液121℃再次高压1h后，重新检测。如果仍为阴性，则培养物的O抗原属于未知。根据表1报告血清学分型结果。

表1副溶血性弧菌的抗原

7 神奈川试验(选做项目)

神奈川试验是在我妻氏琼脂上测试是否存在特定溶血素。神奈川试验阳性结果与副溶血性弧菌分离株的致病性显著相关。用接种环将测试菌株的3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂18h培养物点种于表面干燥的我妻氏血琼脂平板。每个平板上可以环状点种几个菌。36℃±1℃培养不超过24h,并立即观察。阳性结果为菌落周围呈半透明环的β溶血。

8 结果与报告

根据检出的可疑菌落生化性状，报告25g(mL)样品中检出副溶血性弧菌。如果进行定量检测，根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查最可能数(MPN)检索表，报告每g(mL)副溶血性弧菌的MPN值。副溶血性弧菌菌落生化性状和与其他弧菌的鉴别情况分别见表2和表3。

表2 副溶血性弧菌的生化性状

表3 副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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